类型

血清

实验名称

血清素,5-hydroxy tryptamine(5-HT)

关联实验

5-羟基吲哚乙酸;嗜铬粒蛋白A;

关联问题

患类癌的高危人群是哪些？
任何年龄段的人都可能发生类癌，有多发性内分泌瘤综合征（multiple endocrine neoplasia，MEN1，一组遗传性状态，可增加患者进展至内分泌系统腺瘤的风险) 家族史的患者是类癌的高发人群。

实验理由

帮助诊断分泌血清素的类癌瘤。

何时实验

当患者出现提示可能患有类癌的症状如面部潮红、腹泻和/或喘鸣时。

患者准备

采样

采样原则

由于一定量的组织中受体的数目是有限的，因此受体与配体的结合反应是可饱和的。若将不同浓度的放射性配体与受体膜制剂一起孵育，在反应达到平衡时，测定结合配基和游离配体的量，前者为放射性总结合量。同时在另一组相应各管内加入非标记的同一种配体以测定非专一结合量。总结合量与非专一结合量之差，即为特异性结合量。受体特异性结合量显示受体膜制剂的有限结合能力。当放射性配体（3H-5-HT）达到某一浓度时，最高结合值趋于恒定。即受体与配体的结合量开始随放射性配体浓度增加而增加，当放射性配体达到一定浓度时，受体与配体的结合达到饱和，利用此原理，本实验测定5-羟色胺（5-HT）受体配体和大脑受体的结合容量（RT）及受体和配体结合的能力，用平衡解离常数Kd表示。

正常值描述

疾病相关

肝豆状核变性; 混合性结缔组织病; 精神分裂症; 类癌瘤综合征; 类风湿性关节炎; 帕金森病; 偏头痛; 倾倒综合征; 神经衰弱; 系统性红斑狼疮; 震颤性麻痹

摘要

（1）膜受体制备：①脑匀浆：大鼠或小鼠断头放血，将头剪下置冰浴中，并用骨剪剪开头颅立即取出大脑，除去包膜及残血，剪碎后加入相当重量20倍体积的预冷的溶液①，用内切式高速分散器匀浆10000r/min，1min，再用超声波粉碎器匀浆60s。全部过程在冰浴中进行。②离心：脑匀浆在1000×g离心10min，除去细胞核及致密物质，用滴管小心地将上清液移至另一离心管中，再用50000×g离心10min，弃去上清液，沉淀物再用溶液①洗涤离心2次。最后所得的沉淀物为含受体的细胞膜碎片。全部操作都在0～4℃进行。③悬液：沉淀物用溶液②悬浮，再用超声波粉碎器匀浆60s。然后用溶液②配成每毫升悬浮液中含脑组织湿重11.76mg。取0.2ml按lowry法测定其蛋白含量。放冰浴中备用。（2）结合反应 反应总体积为2ml，试管分二部分，一部分为总结合反应管，另一部分非特异性结合反应管。①总结合试验：按表1顺序逐项加试剂。②非特异结合（NSB）试验：本实验以10－5mol/L的5-HT所抑制的结合配体为非特异性结合。用溶液②配制200nmol/L 5-HT溶液备用。按表2顺序逐项加试剂。③温育：最后一项试剂膜受体加入后立即在混旋器上混匀，然后将管子置于恒温水浴中37℃温育10min，不停地振播，使结合反应达到平衡。④结合配基和游离配基的分离温育结束后立即将反应管置于冰浴中终止反应。A.用两层69型玻璃纤维滤纸或GF/B玻璃纤维滤纸，以多头细胞收集器进行减压过滤，用冷的溶液①洗去未与受体结合的游离的放射性配基，可一次抽滤10管，每管用5ml溶液①洗3次，分离时间要在20s完成。分离完毕后，将滤纸置于盘内，80℃烘箱烘干1h。B.如果无多头细胞收集器，可用负压玻璃瓶逐管抽滤。这样一次不能做太多管子，因为分离时间极短。做完一批之后再做第二批。⑤测量：将烘干的滤膜按顺序置于闪烁杯内，并加4ml闪烁液，用液体闪烁计数器测量其放射性。所得计数即为总结合配基的量。（3）结果计算：反应体积是2ml，其中含有20mg湿重的脑组织。本实验室液体闪烁计数器测量滤纸的效率是44%。数据处理目的是计算受体与放射性配基的结合总量（RT）以及它们的Kd常数。常用的方法有Scatchard法和Hill系数法。Scatchard作图法：A.总结合管每管加入的3H-5-HT量，测得的cpm数（复管）。一般加入的3H-5-HT被受体结合的总量小于3%，即加入的3H-5-HT总量（LT）＞＞3H-5HT结合量（B），因为F＝LT－B，所以F≈LT。B.计算非特异性结合量（NSB）：为了减少NSB的误差对特异结合的影响，我们先将实验得到的数据进行直线回归，然后根据方程求相应于每个总结合管的NSB期望值。这样处理后可明显减少NSB数据波动对实验结果的影响。C.计算特异性结合（B）：B＝总结合（cpm）－NSB（cpm）D.求游离配基量（F）：加入3H-5HT总量（LT）＞＞3H-5-HT结合量（B），∵F＝LT－B ∴F≈LT。E.求B/F：（见公式）将上述各项计算综合如表3。以B/F为纵轴，B（pmol）为横坐标作Scatehard图。在计算器上将上表中的B（pmol/g）值输入X，B/F值输入Y，求得直线回归结果是：Y＝－1.145X＋29.1，r＝－0.99，Kd＝8.72nmol/L、BT＝25.4pmol/g组织（脑）。Hill作图：Hill作图的数据列于表4中。表4中第一、二栏为3H-5-HT加入量及其对数。第三栏取自Scatehard作图数据，Bmax＝25.4pmol/g组织。第四、五栏为结合率及其对数，根据这些数据以log[3H-5-HT]为X轴，log[B/(Bmax－B)]为Y轴绘Hill图。经直线回归斜率＝0.94，Hill系数hH＝1.0。kd＝9.3nmol/L。这与Scatehard分析得到的kd＝8.73没有显著差异。

说明

显著升高可以提示类癌综合征，但不能诊断。检测值正常不能排除类癌。 患者体内类癌可能不分泌或者间歇性分泌血清素。患者没有类癌综合征症状并且血清素和5-HIAA检测水平正常或较低，其患有类癌的可能性很低。

结论有效原因

食入大量的核桃、香蕉后也可上升。