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孕酮,Progesterone(P)
关联问题
如果患者处于绝经期并接受激素替代治疗(HRT)时,是否需要监测孕酮水平?
有时需要。若子宫未被切除且还有症状,如无法解释的子宫出血,依然需要检测孕酮。如果子宫已被切除,则HRT不会包含孕酮,可以不用检测。
实验理由
为了帮助确认不孕的原因、评估排卵情况、帮助诊断异位妊娠或妊娠失败、监测妊娠情况、帮助确认异常子宫出血的原因。
何时实验
在女性月经周期的特定时期进行检测,以确定其是否排卵;若在妊娠早期有提示异位妊娠或妊娠失败的症状时需检测;妊娠过程中均可检测,以了解胎盘和胎儿的健康状况;异常子宫出血时也需检测。
采样原则
放射免疫测定法:女性孕酮主要由卵巢的黄体产生,男性血循环中较低水平的孕酮主要由肾上腺皮质产生的孕烯醇酮转化而来。样品中孕酮与定量的3H孕酮和抗体产生竞争结合,达反应平衡后,用DCC来分离结合物(B)与游离孕酮(F),DCC主要吸附沉淀游离部分(F),上清液是结合部分。测量结合部分的同位素计数,算出结合率(B%)对照标准曲线,就可计算出样品中的孕酮含量。
正常值描述
电化学发光法:1-10岁 70-520(0.2-1.7) ng/L(nmol/L)成年男性 130-970(0.4-3.1) ng/L(nmol/L)成年女性卵泡期 150-700(0.5-2.2) ng/L(nmol/L)黄体期 2000-25000(6.4-79.5) ng/L(nmol/L)妊娠早期 7250-44000(23.0-139.9) ng/L(nmol/L)中期 19500-82500(62.0-262.4) ng/L(nmol/L)晚期 65000-229000(206.7-728.2
摘要
(1)标准曲线制作:分别为0,10,20,50,100,200,400pg(复管),60℃水浴压缩空气吹干,加补孕酮11000dpm/20μl吹干,各管加1∶5万0.2ml抗体,4℃恒温过夜,次日加5g/L GPS 0.1ml,2.5g/L DCC 0.5ml,4℃放置10min,3000r/min离心10min吸出上清液0.4ml,加到8ml闪烁液中,混旋1min,避光放4h后用液烁仪测量。 另取四管,各加3H-孕酮11000dpm/20μl,吹干,加1g/L,GPS其中二管作总脉冲(T)。另二管作非特异性测定管(BN%),BN%DCC分离法同标准曲线制作。 (2)未知样品的检测:孕妇取血浆0.05ml或0.1ml,未孕妇或男性取0.2ml,于具塞试管中用重蒸馏水补足剂0.5ml,加0.1mol/L NaOH0.2ml,重蒸二氯甲烷5ml,抽提5min,静置,弃去上层液,二氯甲烷用蒸馏水洗2次,每次1ml,清洗,1500r/min离心3min,吸取二氯甲烷抽提液双份1ml,置45℃水浴蒸干,加3H-孕酮11000dpm/10μl,吹干,加1∶5万抗体0.2ml,以下操作与标准曲线相同。
说明
孕酮水平生理性升高表明女性排卵。病理性增高见于黄体化肿瘤、卵巢囊肿、分泌孕酮等类固醇激素的肿瘤等。 病理性降低可见于垂体功能衰竭、卵巢功能衰竭、黄体功能不全、胎盘发育不良、妊娠毒血症、胎儿死亡等。多胎妊娠(如双胞胎、三胞胎)的女性孕酮水平比单胎妊娠的女性高。
结论有效原因
(1)标记品和标准品均由无水乙醇配制,容易挥发,应将盖子塞紧,贮于4℃冰箱。 (2)抗血清稀释成母液后应存放在4℃,切勿放-20℃低温处,以免反复冻融,降低抗血清效价。 (3)明胶、活性炭、葡聚糖等试剂应放在阴干燥处。 (4)0.1% GPS在夏天,即使放在4℃,也很容易变质,最好一次配量不要太多。如发现明显混浊、发臭等变质现象,应予重配。 (5)在进行B、F分离时,由于DCC时样品需保持恒定的接触吸附时间,所以一批加样管数不可能太多,时间不能太长,控制在3~5min内加完,待离心分离后,再加第二批。 (6)在吸取活性炭溶液(DCC)时,必须保证DCC溶液的充分混匀,以免因DCC浓度的不均而影响分离效果。 (7)抽提用CH2Cl2和配制用的无水乙醇必须重蒸后使用。