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脑脊液载脂蛋白,Apolipoprotein A1，B100，CⅡ，CⅢ，E
实验名称
脑脊液载脂蛋白,Apolipoprotein A1，B100，CⅡ，CⅢ，E
采样原则
用聚苯乙烯微量反应板为固相载体，以apo(a)单克隆抗体(McAb)包被，加入待测标本，使其中的apo(a)与固相化的McAb结合，洗涤除去未结合的标本中其他蛋白质，再加入酶标记的apo(a)McAb，与结合到固相抗体上的apo(a)作用，洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应，显色的程度决定于结合在固相载体的apo(a)量。 McAb应用杂交瘤技术制备，以超速离心结合层析法纯化的LP(a)为抗原。所制备的McAb应与apoB及纤溶酶原(PMG)无交叉反应。混合数株识别apo(a)上不同抗原位点的McAb，用于建立血清LP(a)双抗体夹心法。
正常值描述
(1)单向免疫扩散法：未测出ApoB100、CⅡ，而ApoCⅢ含量极微；ApoA1为0.01±0.0054g/L，ApoE为0.0069±0.0016g/L与22.2%。 (2)火箭免疫电泳法：ApoA1 0.04±0.01g/L。 (3)ELISA法：ApoE 0.008±0.001g/L。。
摘要
(1)单向免疫扩散法。 (2)火箭免疫电泳法。 (3)ELISA法。
说明
脑脊液中载脂蛋白含量远低于血液水平，免疫组化试验证明大脑额叶的星形胶质细胞及某些神经元能合成ApoE，而CSF中的ApoA1与ApoCⅡ可能从血中渗入。但当患神经系统疾病时，可致血脑屏障功能受到损害。使其通透性增高，血液中ApoA1可更多渗入CSF中，ApoA1含量增加；因ApoB100分子量大不能透过，故脑膜炎、脑血管病，脑囊虫患者ApoA1、ApoE在CSF中的水平均升高。载脂蛋白的测定可为诊断某些神经系统病提供有价值的信息。
结论有效原因
(1)LP(a)颗粒中apo(a)与apoB以二硫键相联结；apo(a)的氨基酸组成与PMG有高度同源性，故用LP(a)给动物免疫所得抗血清(多克隆抗体)中同时有抗apoB与PMG抗体，通常用亲和层析法纯化，不易获得纯apo(a)抗体。但用杂交瘤技术制备的McAb可以避免与apoB及PMG的交叉反应。 (2)为了避免孔间差异，减少误差，同一标本最好平行做2～3份，取平均值。 (3)应严格掌握稀释的精密度，由于血清LP(a)水平可小于10mg/L或高达1000mg/L以上，对过高过低的标本应调整稀释倍数后重新测定。 (4)包被抗体与酶标抗体不可反复冰冻融化，稀释/封闭液及底物液应新鲜配制。空白吸光度增高可能由于底物溶液陈旧或封闭不充分。 (5)本法批内CV＜5%，批间CV＜9%。实验误差来源有板间差、孔间差、稀释及加样误差、试剂质量及孵育时间等。