类型

脑脊液

实验名称

脑脊液单克隆抗体检测癌细胞,moncional antibody cancer cell

关联实验

关联问题

实验理由

何时实验

患者准备

采样

采样原则

将新鲜脑脊液标本经1150r/min离心10min，沉渣用白明胶包被于玻片上，然后用苏木素和伊红染色，用磷酸缓冲液冲洗。加适当稀释度的单克隆抗体于玻片上，同时做阳性和阴性对照。置湿盒于室温30min，取出后用PBS冲洗，加入纯化的羊抗鼠IgG荧光素结合物，再置室温30min，干燥后加90%甘油于玻片上于荧光显微镜下观察结果。

正常值描述

阴性。

疾病相关

摘要

(1)直接荧光抗体法： ①抗原基质片(活检组织冰冻切片，被检物直接涂片，培养物涂片等)，经无水乙醇或丙酮、甲醇等(要根据实验要求选择固定剂)固定处理后室温晾干。 ②加荧光标记同属类特异性抗体于基质片上，放湿盒置室温或37℃温箱反应30min～1h。 ③0.01mol/L pH7.2 PBS缓冲液冲洗15min(换3次PBS)。 ④pH7.2或pH7.4缓冲甘油封片。 ⑤荧光显微镜镜检。 (2)间接荧光抗体法： ①抗原(或抗体)基质片(各种组织冰冻切片或培养细胞等)基质片从冰箱取出立即风干。使用前经无水乙醇或丙酮、甲醇等固定剂处理(根据实验要求选择固定剂)，一般固定3～15min，室温晾干。 ②被检物(血清、脑脊液或其他渗出物等)，根据需要用PBS适当稀释(1∶5或1∶10)滴于抗原基质片上，置室温或37℃温箱反应30min～1h。 ③0.01mol/L pH7.2 PBS冲洗15min(更换PBS 3次)。 ④加荧光标记抗体，置室温或37℃温箱30min～1h。 ⑤PBS冲洗同③。 ⑥缓冲甘油(pH7.2)封片，荧光显微镜镜检。 (3)补体法： ①抗原基质片(组织冰冻切片或培养细胞)，从冰箱取出立即风干，经无水乙醇或丙酮、甲醇固定3～15min，室温晾干。 ②被检物(血清或其他)，实验前置56℃水浴中30min灭活，冷却后用PBS根据实验要求适当稀释(1∶5或1∶10)。 ③将上述灭活稀释被检物与新鲜豚鼠血清(生理盐水1∶10稀释)或新鲜正常人血清进行等量混合，滴加在基质片上。置室温或37℃温箱反应30min。 ④PBS冲洗同(2)-③。 ⑤滴加荧光标记抗补体抗体于基质片上置室温或37℃温箱反应30min。 ⑥PBS冲洗同④。 ⑦缓冲甘油封片，镜检同(2)-⑥。 (4)双层法、加层法、混合法、补体法，可根据原理示意图，用上述基本法操作即可。 (5)双重染色法：用于同时示踪两种抗体或抗原，其操作方法同上，只是荧光标记物用两种荧光素标记，一般用异硫氰酸荧光黄(FITC)发黄绿色荧光，另一种是罗丹明B200(RB200)发橙红色荧光，两种标记物可混合应用，也可先后分别应用，在紫外光下可同时被激发，在同一部位发出各自特异标记荧光。 (6)反衬染色法：在上述荧光染色镜检中，为加强特异荧光与背景的对比度。常用反衬染色的方法，来消除背景荧光，突出特异荧光。常用于反衬染色试剂。有RB200、FITC分别做特异的和非特异的标记，二者混合间接荧光染色法染色以达到特异和非特异反衬目的。另一种试剂是伊文思蓝(Evan blue)它发射与RB200类似的橙红色荧光。使用方法可将FITC荧光染色的标本片，浸入1∶1 000～1∶10000稀释的伊文思蓝溶液中2～5min，取出后用PBS冲洗10min，封片镜检。也可将伊文思蓝以适当的比例与荧光标记抗体溶液混合染色，镜检中可观察到明显衬出FITC黄绿色特异荧光。

说明

脑脊液中恶性细胞有癌细胞、神经外胚层瘤细胞和淋巴瘤细胞。其检测阳性率可达60%。单克隆抗体技术可鉴定恶性细胞的组织来源，有助于癌性脑膜病的早期诊断。

结论有效原因

MCAb具有单一性好，特异性强，纯度高和重复性好等特点。