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痰液中分泌型IgA,secretory IgA
实验名称
痰液中分泌型IgA,secretory IgA
采样原则
激光散射光系指一定波长的光通过溶液时遇到抗原-抗体复合物,光线被折射,发生偏转。偏转角度可以从0~90°,这种偏转的角度可因光线波长和离子大小不同而有所区别。散射光的强度与抗原抗体复合物的量成正比,同时也和散射夹角成正比,和波长呈反比。测定方法有终点法和速率法两种。 (1)终点散射比浊法:终点法是在抗原-抗体反应达到平衡时,即复合物形成后作用一定时间,通常为30~60min,复合物浊度不再受时间的影响,但又必须在聚合产生絮状沉淀之前进行浊度测定。 (2)速率散射比浊法:速率比浊是一种先进的动力学测定法,在1977年由Sternbery首先用于免疫测定。所谓速率是指抗原抗体结合反应过程中,在单位时间内两者结合的速度。速率法是测最大反应速度,即反应达顶峰时的峰值,见表1。由上数据可看出,抗原抗体结合反应在几十秒内得出结果,峰值的高低与抗原的量成正比,峰值出现的时间和抗体的浓度、抗原抗体的亲和力直接相关。
说明
SIgA减少时,黏膜抵抗力下降,易患呼吸道感染;经有效治疗后,免疫功能改善,痰中SIgA可回升。对急性支气管炎、慢性气管炎急性发作、肺炎等有一定的辅助诊断意义。
结论有效原因
(1)抗原抗体的比例对浊度的影响:当抗原抗体比例相等时,形成的复合物和解离是相等的。当抗原含量过多时,形成的复合物小,而且倾向于再溶解,可逆反应大。当抗体含量过多时,形成的复合物体积大,且为不溶性,可逆反应小。因此,作为速率比浊,令其抗体过剩,有利于复合物的形成。 (2)抗血清的质量影响:作为免疫反应的抗血清要求效价高、特异性强、纯度高。作为比浊用的抗血清还应具备: ①抗血清的亲和力要大,故动物免疫时可采取小量,长期免疫的方法获得。 ②动物的种类,以R型动物(包括羊、豚鼠、家兔等)制备的抗血清亲和力强,抗原抗体结合后不易解离。 ③抗血清须严格处理,应无干扰离子,可采用高速离心或0.45μm超滤膜过滤以排除干扰。长期保存须放-20℃保存。 (3)抗原抗体反应的溶液。 ①抗原抗体反应最适pH为6.5~8.5,超过此限度则不易形成复合物,甚至可被分解。 ②离子强度可直接影响抗原抗体反应的结合,离子强度大复合物形成快,低则阻碍复合物的形成,应用PBS是较好的反应液。 (4)亲水剂的影响:亲水剂如PEG(聚乙二醇),Tween20,MES(玛啡代-2烷磺酸)等可促进沉淀反应的形成。缓冲液中引入一定的PEG对大分子复合物沉淀是十分重要的。 (5)标准曲线的应用:当试剂条件和室温条件不变时,曲线可相对用一段时间,但不能长期不变。应用质控血清校准,可保证测定值的准确、可靠。