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胃液乳酸脱氢酶同工酶
采样原则
根据LDH各同工酶一级结构和等电点的不同,在一定的电泳条件下,使其在支持物上分离。以乳酸钠为底物,氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)作氢受体,LDH催化乳酸脱氢,生成丙酮酸,并使NAD+还原为NADH。酚嗪二甲酯硫酸盐(PMS)将NADH的氢传递给氯化碘代硝基四唑(INT),使其还原成紫红色甲化合物。因此,有LDH活性的区带即显紫红色,其颜色深浅与酶活性成正比。由阳极至阴极其区带依次为LDH1、LDH2、LDH3、LDH4及LDH5。因电渗作用,LDH5位于加样槽之阴极端。
摘要
(1)制备凝胶玻片:取5g/L缓冲琼脂糖凝胶一管,置沸水浴中加热融化。吸取1.2ml融化的凝胶液,均匀地铺于拭净的7.5cm×2.5cm玻片上,待冷却凝固后,于凝胶板阴极端约1~1.5cm处挖槽,用滤纸吸去槽中水分。 (2)加样:用微量进样器加血清约40μl于槽内。 (3)电泳:电压75~100V,电流8~10mA/片,电泳30~40min,待血清白蛋白部分泳动3~4cm即可。 (4)显色:于电泳结束前5~10min,将底物显色液与沸水浴融化的8g/L缓冲琼脂糖凝胶按4∶5的比例混合,制成显色凝胶液,置热水(约50℃)中备用(注意避光)。 中止电泳后,取下凝胶玻片置铝盒内,立即用滴管吸取显色凝胶液约1.2ml,迅速滴于凝胶玻片上,使其自然铺展覆盖完全,待显色凝胶凝固后,加盖避光,置37℃水浴中,使铝盒浮于水面保温1h。 (5)固定和漂洗:取显色的凝胶玻片,浸入固定漂洗液中20~40min,至背景无黄色为止,再移至蒸馏水中漂洗多次,每次10~15min。
说明
(1)胃癌:LDH升高2~3倍,LDH5>LDH4>LDH3>LDH2>LDH1。 (2)萎缩性胃炎(中度或重度)伴肠上皮化生:LDH4>LDH5>LDH3>LDH2>LDH1。
结论有效原因
(1)同血清LDH。 (2)标本切忌溶血。