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β-血小板球蛋白,β-thromboglobulin
实验名称
β-血小板球蛋白,β-thromboglobulin
采样原则
用抗β-TG或抗PF4抗体包被酶标板,样品中的β-TG或PF4结合于酶标板上,加OPD发色基质液显色。显色的深浅为样品中β-TG或PF4的含量成正比关系。
正常值描述
血浆β-TG为16.4±9.8ng/ml;PF4为3.2±2.3ng/ml。
摘要
(1)所提供96孔ELISA塑料板是经包被、冻干处理的,故可直接上反应。 (2)加样上反应: ①将ELISA包被板平放,第1、2排作标准品测定,从上至下(即从“A”到“G”)依次各加7个不同浓度梯度的标准品100μl,第8排(“H”)不加标准品,只加样品缓冲液(EL-2)100μl作为非特异性“穴”。 ②从第3排起,作待测样品测定,各孔加入样品稀释液100μl。 ③置室温(>22℃)2h或在37℃温箱中温育1h,且需加盖。 (3)酶标反应: ①将静置3h的第一次反应板,吸去内液,用板洗涤液(EL-1)洗涤4次,具体洗涤法是在各孔内加板洗涤应用液(EL-1)200μl。轻轻摇几次,然后吸出内液,在吸水纸上拍干,如此反复4次。 ②将已稀释的酶标应用液,从左至右,从头到尾,于每孔内各加100μl,然后在室温静置1h或37℃温箱中温育1h。第8排(“H”)孔仍用样品缓冲液,不加酶标记液。 (4)发色反应: ①酶标反应1h后,应立即用板洗涤应用液(EL-1),反复洗涤4次,吸干,然后再进行发色反应。 ②于每孔各加发色基质稀释液200μl,加时应立即记录时间,全部应在4.5~5min内完成,注意控制时间或发色反应速度,显示颜色不可太淡或太深(即第1排A值在1.0以上,第8排在0.1左右最佳)。 ③待发色反应已见到有明显梯度变色(参考反应时间为4.5~7.0min)立即按原先前后次序,逐孔加入3mol/L H2SO4应用液50μl,以终止反应。10min后,以492nm滤光片在酶标反应仪上进行测定。
结论有效原因
(1)吸取原液必须吸净,用应用液反复洗几次。 (2)加样时均需混合后进行,发色基质稀释液及酶标抗体都要在临用前新鲜配制。