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精液乳酸脱氢酶-X,LDH-X
采样原则
正常精液内含有6种乳酸脱氢酶同工酶,其中LDH-X为精子特异性酶。利用LDH-X的特异底物2-酮基己酸,可测定出LDH-X活性,再用丙酮酸作为总LDH的底物,测定出总的LDH活性,即可求出LDH-X的相对比值和绝对比值。
摘要
(1)点样:将醋酸纤维素薄膜切成2.0cm×8.0cm大小,每份标本取两条,标明“甲”,“乙”,将乙条浸入在pH7.5的磷酸盐缓冲液中。将甲条浸在巴比妥缓冲液中,完全浸透后取出(大约2h),用滤纸吸干、于粗糙面距一端1.5cm处垂直点样(点样端靠阳极)。 (2)通电:电流0.6~1.2mV/cm宽,电压120~140V,电泳时间60min。 (3)显色:电泳结束前15min配制染色液,于中号平皿内。将浸透的乙条取出用滤纸吸干,放入染色液内。电泳毕后;先取出乙条,其光面向下放在干净的载玻片上,再取出甲条,迅速吸干两端缓冲液,将粗面向下,盖在乙条上。将此载玻片移入有盖瓷盘内,盘内放置用pH7.5的磷酸缓冲液泡过的纱布一块,以保持湿度,于37℃温箱中保温40min。可显出3~5条紫红色区带,从阳极开始,依次为LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。保温结束后将薄膜在2%醋酸溶液中漂洗3次,每次约1min,最后用滤纸吸干。 (4)定量:将已显色的“甲”、“乙”二条薄膜之各区带分别剪成小片置于试管中,每一试管中加洗脱液2.0ml,充分振摇,静止20min后再振摇1次,即可进行比色(用分光光度计波长490nm,以洗脱液校正吸光度到0点)。
说明
LDH-X活性和相对活性(LDH X/LDH)与精子浓度特别是活精子浓度呈良好的正相关,活性减低可致生育力下降。 睾丸萎缩、精子生成缺陷及少精或无精症患者,LDH-X活性相对降低或消失。这说明LDH-X活性与睾丸生精功能有关,是评价睾丸生精功能的良好指标。
结论有效原因
(1)LDH仅作用L-乳酸钠,只用DL-乳酸钠量一半即可。 (2)草酸盐能抑制乳酸脱氢酶的活力,故不能用草酸钾作为抗凝剂的抗凝血来测定。 (3)如长期食用粗制株籽油可致精子生成障碍,甚至无精子生成。