羊水细胞性染色质检查
类型
羊水
实验名称
羊水细胞性染色质检查
关联实验
关联问题
实验理由
何时实验
患者准备
采样
采样原则
同羊水细胞染色法原理。
正常值描述
X染色质:>0.06为女性胎儿,<0.05为男性胎儿; Y染色质:>0.05为男性胎儿,<0.04为女性胎儿。
疾病相关
血友病A; 血友病B
摘要
(1)取孕期16~20周羊水15~30ml,1000r/ml离心10min。 (2)弃去多余上清液,留1ml羊水和沉淀细胞,轻轻打散成细胞悬液。 (3)移入25ml方形培养瓶中,加pH6.5~6.8(含青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml)的培养基3ml及小牛血清1ml,置37℃温箱中培养。 (4)培养7~10天后可见大量成纤维样或上皮样细胞集落。此时可调换新鲜培养液。 (5)待细胞集落扩大成片,并有许多透亮的圆形分裂细胞时,即可加入秋水仙素,使最终浓度为0.1~0.3μg/ml,置37℃温箱中再培养5~6h(上述过程均在无菌条件下进行)。收获标准:①以成纤维细胞为主要类型,成片细胞生长;②以10倍目镜和20倍物镜观察,生长的细胞克隆覆盖1个或1个以上完整视野;③见到10个以上透亮的圆形细胞和10个以上双圆形光亮的分裂细胞。 (6)如果细胞生长不旺盛,生长周期不齐或细胞老化,未达收获标准,可在原瓶继续传代培养。方法:在无菌条件下先倒去培养液,加入2.5g/L无菌胰蛋白酶液数滴,摇动后倒去。再加入胰蛋白酶5~10滴,在37℃下轻轻摇动约5min,使贴壁细胞脱落。加入含小牛血清的新鲜培养基4ml,在37℃静置培养4~5h。再小心更换培养液,继续培养,一般传代后3~5天即可收获。 (7)将培养液移至刻度离心管中,加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培养瓶内,置37℃温箱中5min,然后用弯头吸管冲洗贴壁细胞(也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中,与原培养液相混合,并用少量温热生理盐水冲洗培养瓶,洗下的细胞也一并倒入该离心管,以1000r/min离心10min。 (8)吸弃上清液,加入预温37℃的0.075mol/L KCl低渗液3~5ml,置37℃10~15min。 (9)预固定、固定及制片均与外周血细胞染色体标本的制备法相同。
说明
对有X性连锁隐性遗传病家族史者来说,父母表型正常,如母亲为致病基因携带者,其子女中儿子患病的概率是50%;女儿则表型正常,但有一半可能是携带者。当父亲为患者时,儿子全部正常,而女儿全部为携带者,如血友病A、血友病B、葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症、红绿色盲、假肥大性肌营养不良、先天性丙种球蛋白缺乏症等。
结论有效原因
(1)染色体检查须于妊娠16~20周时取羊水标本。 (2)这些先天性遗传病的染色体有增多、缺乏、易位、倒置等数量和结构的异常,常表现为一种综合征,如多发性畸形、生长迟缓和智力缺陷等,多数导致胎儿流产、早产或死产。
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