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泪液乳铁蛋白
采样原则
根据朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律当光线通过抗原抗体反应系统时,由于溶液中存在抗原抗体复合物,光线被吸收。吸收的量和复合物的量成正比(图1)。 E:吸光度变化率; Io:入射光; I:透光度; C:溶液的浓度; K:cd或常数; c:分子吸光系数; d:光路长。 测定方法有沉淀反应免疫比浊法和乳胶颗粒被动凝集免疫比浊法。 (1)沉淀反应免疫比浊法:当抗体过剩时,抗原、抗体最适比值浓度范围大致呈直线。应用紫外波长(340nm)可测定抗原抗体复合物浊度。大多数光电比色计,分光光度计及自动生化分析仪均可用于比浊。 (2)乳胶颗粒被动凝集免疫比浊法:将抗体致敏在乳胶颗粒上,加上抗原时,致敏的乳胶颗粒与抗原相结合,形成大小不等的凝集块。凝集颗粒小时,光可通过;凝集颗粒大时,光散乱,透过光减少。利用此原理,可采用两种方式比浊。 ①白色光乳胶颗粒比浊法:乳胶颗粒直径在0.1~0.8μm范围时,粒径大,吸光度增加,用500nm左右波长;0.1μm粒径可用585nm波长进行测定。 ②近红外光乳胶颗粒比浊法:与白色光比浊原理相同,粒径0.2μm乳胶颗粒,可用940nm近红外光测定。
正常值描述
1.04~2.23g/L 40岁后逐渐下降,70岁以上者为0.85~1.63g/L。反射泪比保留泪含量高,正常成人>3g/L。
说明
同溶菌酶,但更为灵敏。反映泪液LF<1g/L对干性角膜炎具有确诊价值。
结论有效原因
(1)透射比浊时,应采用颗粒吸收最强烈的波长,否则将影响曲线斜率。 (2)应保证检测仪器的良好性能,测定仪器光学系统调换零件时,应重新绘制比浊法的曲线,否则容易引起误差。 (3)比浊法易受外界条件的影响,因此,试验条件、试剂浓度、用量等要求一致,混悬液中颗粒大小要均匀,重现性好,否则将影响结果。