类型

血清

实验名称

血清钙,Serum Calcium

关联实验

关联问题

实验理由

何时实验

患者准备

采样

采样原则

(1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB)：血清中的钙离子在碱性溶液中与甲基百里香酚蓝(MTB)结合，生成一种蓝色的络合物。加入适量8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，求得血清总钙含量。 (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法：邻甲酚酞络合酮(OCPC)是金属络合染料，也是酸碱指示剂，在pH11.0溶液中与钙及镁螯合，生成紫红色螯合物。作钙测定时，在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。与同样处理的钙标准液比色，可求得血清钙含量。(3)乙二胺四乙酸二钠滴定法：标本中钙离子在碱性溶液中与钙红指示剂结合成为可溶性复合物，使溶液成淡红色。乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA-Na2)对钙离子的亲和力很大，能与该复合物中的钙离子络合，指示剂重新游离而使溶液呈现蓝色。所以在滴定钙时，加入钙红为淡红色，用ED-TA-Na2滴定转变为蓝色时，为滴定终点。与同样处理的钙标准液滴定，计算出标本中的钙的含量。(4)离子钙测定：离子选择电极是一种化学传感器，它能将溶液中某种特定离子的活度转变成电位信号，然后通过仪器来测量。电极电位随溶液中离子活度变化的关系服从Nernst方程。 选择电极的电位(E)与溶液中被测离子活度的对数成线性关系。 血液抽出后，溶解于其中的CO2气体会释放到空气中，使血液pH值变碱性，而血液pH值则与离子钙浓度之间成负相关的关系，pH值增加0.1，离子钙浓度约降低4%～5%。所以新型的离子型的离子钙分析仪都是在测定血清离子钙浓度的同时，测量血清pH值，再计算出pH7.4时的标准化离子钙(nCa2＋)浓度。 离子浓度分析仪通常采用比较法来测定样品溶液中离子钙和pH值，即先测量二个已知浓度标准液中的离子钙和pH的电极电位，在仪器程序内建立一条斜率曲线，然后测量样品溶液中离子钙和pH的电极电位，从已建立的斜率曲线上求出样品溶液中离子钙浓度和pH值，并计算出标准化离子钙浓度，直接在仪器上显示出结果或打印出分析报告。

正常值描述

(1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB)： ①血清钙：成人2.03～2.54mmol/L           儿童2.25～2.67mmol/L ②血清离子钙：1.13～1.35mmol/L ③红细胞钙：全血中的钙几乎都在血浆中，红细胞中只有15.72μmol/L压积细胞。 ④尿钙排泄量：随饮食不同而有较大幅度的变化： A.低钙饮食时＜3.75mmol/24h； B.一般钙饮食时＜6.25mmol/24h； C.高钙饮食时可达＜10mmol/24h。 ⑤唾液钙：0.74～1.69mmol/L。 (2)邻甲酚酞

疾病相关

阿狄森病; 代谢性酸中毒; 多发性骨髓瘤; 高钙血症; 佝偻病; 急性胰腺炎; 甲状旁腺功能减退; 甲状腺功能亢进症; 结节病; 慢性肾功能衰竭; 慢性肾炎; 乳糜泻; 软骨病; 烧伤; 肾病综合征; 新生儿低钙血症

摘要

(1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB)： 按表1操作。混匀，静置5min后，用波长610nm或红色滤光板，光径1.0cm比色，以空白管调吸光度至0点，分别读取各管吸光度。 (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法： 按表2操作。混匀，5min后用波长575nm或红色滤光板，光径1.0cm比色，以空白管调吸光度至0点，分别读取各管吸光度。 如果标本混浊，黄疸或溶血，需作校正试验，即：于空白管及测定管中各加入5g/LEGTA溶液0.05ml，再测吸光度，两次读取的吸光度差，即为校正吸光度。 (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法： 按表3操作。混匀，管内液体呈淡红色，迅速用乙二胺四乙酸二钠溶液滴定至溶液呈淡蓝色为终点，记录各管EDTA-Na2用量(ml)。 (4)离子钙测定：商品的离子钙分析仪所用的钙电极都采用中性载体作钙电极的活性材料制成聚氯乙烯(PVC)电极膜，电极的寿命约半年左右：pH电极由特殊玻璃毛细管制成；参考电极采用银/氯化银制成。 各种型号的离子钙分析仪的试剂配方、试剂用量、操作方法有所不同，一般要进行下列步骤。本法以一种国产的离子钙分析仪为例。 ①接上电源，仪器首先进行显示及电子线路检测，结束后即可进行二点斜率定标。 ②斜率定标时，推出吸样针先后将其浸入盛有低、高二个浓度斜率定标仪的小瓶中，吸取斜率定标液，待仪器发出“嘟”声后移去。吸样针推回原处，仪器自动进行斜率定标。 ③定标通过后，可进行样品测量。 A.毛细血管血测量：将毛细管血混匀，推出吸样针，取掉两端塞子，一头装上接头，将接头另一端装在取样针上，按“测量”键至样品完全充满样品测量腔后，再松开“测量”键，进样泵即停止工作。此时应检查样品测量腔内的样品是否有气泡，如有气泡存在，应在松开“测量”键8s内，再按“测量”键，继续吸取样品，直至排除气泡为止。移去样品，擦净吸样针并推回原位，在进样结束8s后即显示测量数据并打印结果。 B.血清测量过程同全血测量。 ④标本测量结束，仪器冲洗管路和样品测量，冲洗好后即可进行下一个样品的测量。 ⑤在最后一次定标或血样测量结束后10min不操作仪器，仪器将进入“休眠”状态。此时如需进行血样测定，必须先进行一点定标。若没有血样测定，仪器每隔30min自动进行一次一点定标。

说明

(1)乙二胺四乙酸二钠滴定法： ①血钙增高： A.甲状腺功能亢进症：有原发性和继发性两种。继发于佝偻病、软骨病和慢性肾功能衰竭。血钙增高大于2.6mmol/L，最高可达4.5mmol/L，同时血磷降低，小于1.13mmol/L，最低可达0.64mmol/L。尿钙增高，男性大于9.68mmol/24h，女性大于8.07mmol/24h。 B.维生素D过多症：血清钙、磷均可增多，钙质沉积于肾脏可发展成肾脏钙化病。 C.多发性骨髓瘤血钙增高：常因球蛋白增高，同钙结合增高。 D.肿瘤广泛骨转移：血钙中度增多，但磷正常或略高，尿钙排泄增多，尿中羟脯氨酸排泄增多，反映骨质胶原的分解。 E.阿狄森病。 F.结节病：由于肠道过量吸收钙，而使血钙增高，血磷略高。 ②血钙降低：血钙减低可引起神经肌肉应激性增强而使手足搐搦，可见于下列疾病： A.甲状旁腺功能减退：甲状腺手术摘除时以及甲状旁腺而引起功能减退，血清钙可下降到1.25～1.50mmol/L，血清磷可增高到1.62～2.42mmol/L，假性甲状旁腺功能减退并非缺乏甲状旁腺激素，而肾脏中缺乏对甲状旁腺激素起反应的腺苷酸环化酶，故引起血清钙降低。 B.慢性肾炎尿毒症：肾小管中维生素D3-1羟化酶不足，活性维生素D3不足，使血清总钙下降，由于血浆白蛋白减低使结合钙减低，但代谢性酸中毒而使离子钙增高，所以不易发生手足搐搦。 C.佝偻病与软骨病：体内缺乏维生素D，使钙吸收障碍，血清钙、磷均偏低。 D.吸收不良性低血钙：在严重乳糜泻时，因为饮食中的钙与不吸收的脂肪酸生成钙皂而排出。 E.大量输入柠檬酸盐抗凝血后：可引起低血钙的手足搐搦。 (2)离子钙测定： ①离子钙的测定对较大的外科手术是最重要的，如心脏手术、移植及其他需大量输入柠檬酸盐的抗凝血的手术或术后脓毒血症、肾、心肺衰竭的病人，或烧伤病人，因这些状态下血清蛋白的水平已经减少，出现酸碱失衡和输入柠檬酸盐血液制品，反复测定总钙已经没什么意义。如果要补充钙，离子钙测定对于这些病人的正确治疗是最好的指南。 ②当怀疑有新生儿低钙血症时，应测定离子钙，如果继续出现并发症，更应该经常测定。 ③肾脏疾病在肾移植后，或进行血液透析的病人，钙代谢经常改变而且有时很激烈。因此在做血透时维持轻微的血钙平衡对保持良好的心脏功能是重要的。而离子钙的测定是对此监测的最好手段，肾病综合征以血清蛋白减少为特征，总钙和离子钙水平均下降。以蛋白水平纠正总钙可能引起过高估计离子钙。 ④原发性甲状旁腺功能亢进的病人，90%以上的病例离子钙升高，大约80%的病例总钙升高。 ⑤急性胰腺炎的病人，离子钙在发病后24h内降低，而到48h恢复正常。总钙在48h还轻度降低，这时由于白蛋白也降低之故，持续的离子钙降低与严重的胰腺炎有关。 ⑥恶性肿瘤病人离子钙增高的百分比大于总钙，也许可用于肿瘤的过筛试验。当高钙血症的原因难于确定时，必须考虑到恶性肿瘤的存在。

结论有效原因

(1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB)： ①MTB与EDTA有相似的氨羧结构，能螯合多种阳离子，但络合稳定常数不同。 ②加入：EDTA的作用，目的在于掩蔽试剂中污染的钙以及其他的金属离子。能降低空白管吸光度，提高测定管吸光度，从而使方法灵敏度提高。 ③EDTA的用量选择，绝大部分金属离子与EDTA的络合稳定常数大于钙，小于钙的仅是少数微量元素。限量的EDTA仅能掩蔽试剂中的干扰元素，没有多余的EDTA络合血清钙，一般加入配试剂中的浓度EDTA99～108μmol/L，最终络合显色反应的EDTA浓度50～54μmol/L。 ④所用的试管清洗后用去离子水浸泡两次，再烤干备用。清洁管加入试剂后应显一致的浅灰绿色，若显蓝色则试管表示有钙污染。 (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法： ①本测定用血清或肝素抗凝血浆标本。不能用钙螯合剂(EDTA-Na2)及草酸盐作抗凝剂的标本。 ②邻甲酚酞是一种酸碱指示剂，在结构上与甲基百里香酚蓝相似，在中性或酸性环境中无色，仅在碱性溶液中和钙离子络合呈紫红色。所以pH对显色有很大的影响，在pH10.5～12时，此反应敏感性最好，故用pH11为宜。 ③试剂中加入8-羟基喹啉消除镁的干扰，能特异地络合镁，TritonX-100具有消化蛋白的影响。有的作者，在试剂中还加入氰化物掩蔽其他金属离子；二甲亚砜消除蛋白影响及抑制邻甲酚酞络合物的解离，从而降低空白液的吸光度；聚乙烯吡咯烷酮亦能消除蛋白质、胆红质及磷的干扰。 ④用来作血清钙测定的碱性缓冲液较多，可根据条件选用，常用的有乙二胺-氰化钾、乙二胺-醋酸钾-盐酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺-硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。用乙二胺-乙二醇缓冲液测定呈色稳定。乙醇胺-硼酸缓冲容量较大，并能使空白试剂的吸光度保持较低读数。2-氨基-2-甲基-1-丙醇无毒，无刺激性，也能使空白管有较低的读数。 ⑤显色剂有时略有结晶析出，是8-羟基喹啉在水中溶解度很低，易析出结晶所致，这时可取上清液应用。 (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法 ①测定标本若有黄疸或溶血时，终点不易观察，则必须将标本进行处理，首先用草酸盐将钙沉淀，再用盐酸及柠檬酸钠重溶。 A.尚需增加几种试剂：0.7mol/L草酸铵；0.05mol/L柠檬酸钠；1mol/L盐酸。 B.按下法操作：吸取血清0.1ml，置于离心管中，加去离子水0.25ml、0.7mol/L草酸铵0.05ml，混匀。置56℃水浴中15min。离心沉淀2000转/分10min。小心倾去上清液，并将离心管倒立于滤纸上吸干。加1mol/L盐酸及0.05mol/L柠檬酸钠各0.1ml于离心管中，溶解沉淀。按直接滴定法进行滴定及计算。 ②钙指示剂种类繁多，名称较乱，不同指示剂所显滴定终点不同，受其他离子干扰的作用也不一样，钙红指示剂终点明显，且较少受镁离子等干扰。但本身不稳定。要经常新鲜配置，加入标本内后要立即用EDTA-Na2滴定。所用钙红为钙-羧酸钠，应与乙二醛缩双邻氨基酚的别名“钙红”相区别。 (4)离子钙测定： ①测定离子钙最好用血清。优点不参入抗凝剂，减少蛋白对电极的污染。肝素抗凝全血亦可用于离子钙测定，尤其急需要结果减少了凝血时间和离心分离血清的时间。但过量的肝素(30u/ml)能使离子钙浓度降低3%～5%。 ②pH改变对Ca2＋影响较大。pH降低能使Ca2＋增加，反之能使钙离子减少，故采到的血标本尽可能防止CO2逸出，避免pH增加。 ③标本应尽快测定，最好在采样后1h内完成。全血密封贮存于4℃冰箱可稳定6h或更长些时间。密封在注射器中的血清，若无气泡存在，室温可保存1～2h，4℃可保存24h以上。 ④离子钙含量还与下列因素有关： A.站立能使离子钙增高约1%～2%。 B.延长静脉淤血的时间能使离子钙增加2%，淤血时前臂运动几分钟离子钙可增加8%。 C.卧床3～12天足以使离子钙超出正常范围。