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全血铅,Plumbum Acid
采样原则
(1)红细胞原卟啉的荧光光度测定法：原卟啉(EP)为一荧光物质。用乙酸乙酯-乙酸混合液使红细胞破坏，卟啉溶出，再用盐酸提取其中之EP，在激发光403nm，发射光605nm处显示其荧光谱峰，可根据荧光强度进行定量。 (2)石墨炉原子吸收光谱法测定血铅：血样用基体改进剂溶液稀释后，直接注入热解涂层石墨管中，在设定的不同温度下，顺序进行干燥、灰化和原子化，然后在283.3nm波长下读取吸光度，在标准曲线下查出与吸光度值相对应的B-Pb浓度。（3）红细胞ZPP快速测定：采用表面荧光法测定血液中锌原卟啉（ZPP）的含量。人体红细胞内含一定量ZPP，受特定蓝色光激发时，ZPP产生荧光，且荧光强度与ZPP含量成一定比例关系。测定荧光强度即可推算ZPP含量。
正常值描述
（1）红细胞原卟啉的荧光光度测定法：①正常参考值：不接触铅者血EP范围57～511/μg/L（0.10～0.91/μmol/L），中位数为227μg/L（n＝46）。全国范围的EP正常参考值调查结果为几何平均数（GM）＝280μg/L（0.50μmol/L），P95参考值范围为＜610μg/L（1.09μmol/L）（n＝978）。②可接受上限值：用判别分析法求得的职业铅接触人群的EP可接受上限值为1.29mg/L（2.30μmol/L）（n＝902）。③诊断下限值：用判别分析法求得的职业性铅中毒的
摘要
(1)红细胞原卟啉的荧光光度测定法： ①仪器操作条件：930型荧光光度计10mm荧光比色皿。用42#(581光电比色计滤光片，420nm)，为激发滤光片和55#(550±10nm)发射滤光片。 ②测定：取10ml具塞试管按表1
配制标准系列和测定管。各管分别置旋涡混合器上混合10～15s后，于2500r/min离心，取上清液，各加0.5mol/L盐酸4ml，加塞，再混合20～30s，吸去上层有机溶剂，取下层盐酸溶液测定荧光强度。标准管读数（格）减去空白管读数（格）后绘制标准曲线。（表1)（2）石墨炉原子吸收光谱法测定血铅：①仪器工作条件设置：原子吸收分光光度计（PE 3100型），具L＇vov平台的热解涂层石墨管和自动进样品。测定B-Pb的仪器参数设置：波长：283.3nm；狭缝：1.3nm；积分吸收值信号：读数延迟0s，积分时间3.5s；灯电流10mA；重复3次；时间-温度程序（表2）
持续时间：69s；10倍稀释样品注入体积：12μl；每份样品测定周期：106s。②标准曲线制作：取8个具塞聚丙烯塑料离心管（1.5ml），按表3制备标准管，混合后从各管取出12μl，以手工进样或自动进样方式，按所设定的仪器操作条件，读取各管的积分吸光度值（A．s）。1～7号管的A．s分别减去“0”管的A．s。以铅的含量为横坐标，测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。本法的标准曲线性范围可达100μg Pb/L。 （表3）
③样品测定：将K2EDTA抗凝的静脉、血或末梢血充分混合后，取50μl，加450μl基体改进剂溶液，混合。手工进样时，取12μl注入石墨炉；采用自动进样方式时，自动进样器自动吸取12μl混合的稀释血样注入石墨管平台。按所设定的仪器操作条件，读取各管积分吸光度值（A．s）。 （3）红细胞ZPP快速测定：①仪器：ZPP-3800型血液锌原卟啉测定仪（广东省职业病防治院研制）：24mm×24mm盖玻片（上海产）。②血样测定：取20～30μl末梢血样滴入盖玻片，盖满仪器测定区域，无气泡，搅拌后推入进样台，待读数稳定后读取（或打印）结果。③质量控制：用与血样测定相同的操作，测定红细胞ZPP标准物质的ZPP含量，结果应在其标称值范围内。
说明
（1）B-Pb的诊断意义：B-Pb是反映近期铅接触的敏感指标。国内一项调查显示，B-Pb与空气中铅浓度呈高度相关（r＝0.6379，P＜0.01，n＝895），与铅接触和铝中毒程度（症状）之间存在较好的剂量反应关系。B-Pb与其他指标如U-Pb（r＝0.7935，P＜0.0005，N＝895），EP（r＝0.7743，P＜0.001，n＝895）和ZPP（r＝0.7326，P＜0.0025，n＝895）也呈显著相关。目前在铅接触危害监测和诊断中，B-Pb测定已成为生物接触指标中的首选指标。在观察铅对职业性接触危害、妊娠（胎儿）、儿童认知能力以及成人肾功能影响的研究中都把B-Pb作为主要的，或唯一的生物监测指标，而且都观察到这些有害影响与B-Pb浓度有关。1991年美国CDC在宣布把儿童铅可接触值由250μg/L降至100μg/L的同时，推荐B-Pb测定为筛检和诊断儿童铅接触的最佳生物监测指标。此后，B-Pb测定的需求迅速增加。（2）U-Pb的诊断意义：尿铅可反映铅从体内排出情况，能间接反映吸收的铅量多寡。但由于U-Pb浓度受测定方法、留尿时间、样品污染以及浓缩和稀释等因素的影响，结果波动大，不能灵敏可靠地反映体内铅水平。有时体内虽有大量铅蓄积，U-Pb排出量并不高，只有在作驱铅试验后才明显升高。目前U-Pb测定主要用于观察驱铅治疗效果。（3）EP和ZPP的诊断意义：70～80年代国内外在职业性铅接触危害的监测和诊断中EP和ZPP这二项卟啉指标曾广泛应用。这是基于铅干扰卟啉代谢而影响血红素合成，导致红细胞中EP、ZPP浓度增高。尽管EP和ZPP的增高程度与病情严重程度不一定平行，但对铅中毒有诊断价值。1989年发布的我国国家标准（GB11504-89）将卟啉指标列为铅中毒诊断条件之一。80年代儿童铅可接触值为1.21μmol/L（250μg/L）的情况下，EP测定在儿童铅接触和铁缺乏的筛查中，也是很好的指标。但是进入90年代，在美国等国家，EP测定逐渐被淘汰，原因是美国CDC于1991年修正并颁布儿童血铅的可接受值，由原来的1.21μmol/L（250μg/L）降低到0.48μmol/L（100μg/L），并要求直接测定B-Pb，而不是用间接的方法（如ZPP）筛检B-Pb。加拿大某些地方也把儿童和成年女性的B-Pb可接受上限值定为0.48μmol/L，男性则为0.72μmol/L（149μg/L）。由于方法敏感性所限，ZPP不能筛检出B-Pb升高在048～1.21μmol/L之间的，有亚临床铅中毒的儿童和成年女性。但EP或ZPP在职业性铅接触危害筛检方面仍有较大价值。尤其在生产环境现场取末梢血作EP测定时样品不易受环境污染，测定结果与静脉血一致，而末梢血铅与静脉血铅相比，存在一定偏差。近年来，由于操作简便、快速、准确的国产血液ZPP测定仪的研制成功并投入生产，促进了国内血ZPP测定在职业性慢性铅中毒筛检和诊断方面的应用。（4）尿ALA的诊断意义：铅中毒时，红细胞δ-氨基乙酰丙酸脱水酶（ALA-D，EC4.2.1.24）的抑制导致红细胞、血浆和尿中δ-氨基乙酰丙酸（ALA）浓度先后升高。早年尿中ALA测定曾被作为筛查职业铅接触危害的重要手段。但是，拿今天的标准衡量，这项指标对检查铅毒性不够敏感，对早期诊断不够理想，因为只有当B-Pb浓度＞1.93μmol/L（400μg/L）时，尿ALA浓度才显著升高。而且，要求定量收集24h尿，这一点也使其应用受到限制。但是由于测定方法简单，测试费用低，以及非侵入性取样等原因，在我国的基层普查中应用仍较多，其他一些国家也有应用。
结论有效原因
（1）红细胞原卟啉的荧光光度测定法：①本法检测限为50μg/L EP，批间精密度变异系数（CV）4.3%～7%。相对回收率96.6%。本法与荧光分光光度法测定结果之相关系数r＝0.9796，P＜0.001，呈非常显著相关，说明本法有较高的灵敏度，精密度和准确性，且仪器为国产品，价格适中，适宜于在国内推广应用。②血样在0～4℃存放时间不宜过长，应在7天内完成分析。③正常人红细胞原卟啉是游离的，故一般称游离原卟啉（FEP）。铅中毒或缺铁性贫血时，红细胞增加的原卟啉主要以锌原卟啉（ZPP）形式存在，但用乙酸乙酯和冰醋酸混合液破坏血中红细胞时，可使ZPP转变为EP，所以用萃取法测定时称为EP较妥。（2）石墨炉原子吸收光谱法测定血铅：①本法的特点是采用了平台石墨炉原子化技术，积分吸光度，样品和铅标准液用含磷酸二氢胺、Triton-X 100和硝酸的基体改进剂稀释，以及简单的连续背景校正，这些都是稳定温度平台石墨炉（STPF）技术的基本条件。方法学评价结果：最低检测限约5μg/L（0.025μmol/L），精密度：批内CV0.4%～5.4%，批间CV 1.0%～4.7%；准确度：低浓度铅质控物（靶值约为70μg/L）的实测值在靶值±10μg/L范围内；高浓度铅质控物（靶值＞200μg/L）的实测值在靶值±6%靶值范围内。本法与具Zeeman背景校正的AAS（4100 2L型）所测B-Pb的相关性良好（y＝1.005X＋0.089，r2＝0.997，n＝44）。②本法灰化程序中，在“热解”后增加“冷却”这一步骤是为了减少沿石墨炉热梯度的影响。这一步骤适用于有纵向加热石墨炉（longitudinally heated furnance）的AAS（如PE 3110型AAS）。侧面加热石墨炉（side heated furnance）无此热梯度（如PE 4100 2L型AAS），热解后可不作冷却处理。③用连续背景校正的AAS作B-Pb测定时，有时出现分析结果偏低，或分析信号低于基线，这种情况一般是由于光源未调直引起的干扰。应细心调整仪器，使背景校正器的光束与空心阴极灯的光束恰好重叠。④方法建立后要用标准物质评价方法的准确度和精密度；样品测定过程中要用标准物质作质量控制检查。中国预防医学科学院环境卫生监测所有国家计量局授权生产的“全血铅镉成分分析标准物质（GBW 09132～09134）”供应。（3）红细胞ZPP标准物质①仪器需经常用ZPP标准物质校验，保证仪器性能良好。②盖玻片的本底值直接影响ZPP的测定结果，用前需清洗及筛选，弃去本底值过高者。