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血清已糖
采样原则
在已糖激酶催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP),同时使NADP+还原成NADPH。反应式如下: (图2) 根据反应方程式,NADPH的生成速率与已糖浓度呈正比,在波长340nm监测吸光度升高速率,计算血清中已糖浓度。
正常值描述
6.74±0.07mmol/L(121.5±1.3mg/dl)。
摘要
(1)速率法测定(以半自动分析仪为例):①主要参数:系数8.2 孵育时间30s 监测时间60s 波长340nm 吸样量0.5ml 温度37℃ ②加样:37℃预温酶混合试剂1000μl,加血清20μl,立即吸入自动分析仪,监测吸光度升高速率(△A/min)。 ③计算: (图1)
(2)终点法测定:取16mm×100mm试管,按(表1)编号与操作。以上各管充分混匀,在37℃水浴,准确放置10min,分光光度计波长340nm、比色杯光径10mm,用蒸馏水调零,分别读取各管吸光度(Au、Ac、As、Ab)。
结论有效原因
(1)已糖激酶方法的特异性比葡萄糖氧化酶法高,是目前公认为测定血糖的参考方法,适用于自动分析仪。轻度溶血、脂血、黄疸、维生素C、氟化钠、肝素、EDTA和草酸盐等不干扰本法测定。因为从红细胞释放出的有机磷酸酯和一些酶能消耗NADP,故干扰本法测定。 (2)虽然根据NADPH的摩尔吸光度可以直接计算血清葡萄糖浓度(如Boehringer、Roche等试剂盒),但建议最好同时测定标准管和空白管(蒸馏水代替血清)。此时计算公式应为: