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胆固醇酯与总胆固醇比值,
采样原则
血清中的胆固醇酯被胆固醇酯酶水解成游离胆固醇,后者被胆固醇氧化酶氧化为△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢。再经过氧化物酶催化反应指示剂显色(通常用Trinder反应):醌亚胺在480~550nm波长有最大吸收,所产生颜色强度与血清总胆固醇量成正比,再通过与同样处理的标准血清比较,经计算即可求出血清总胆固醇与胆固醇脂的比值。
摘要
(1)吸取血清标本、标准、水(空白)各20μl。 (2)加入2ml酶试剂,旋涡混合器混合数秒。 (3)37℃水浴保温10~15min。 (4)比色。以试剂空白调零。分别读取标准与血清标本的吸光度值。
说明
(1)鉴别肝内外黄疸:阻塞性黄疸比值正常,肝细胞性黄疸比值降低。 (2)增高:肝细胞损伤、病毒性肝炎早期、家族性卵磷酯胆固醇酰基转移酶缺乏。
结论有效原因
(1)应用自动分析仪时可根据仪器条件及试剂反应情况设计反应程序。自动分析仪要求酶反应快速(最好5min内完成反应)。反应慢的试剂只可用于手工操作,待反应达到终点时再比色。试剂和标本用量可根据比色杯容积按比例放大或缩小。 (2)为保证酶反应迅速、完全并利于酶试剂长期稳定保存,要求酶制剂性能好、酶过量。酶试剂配好后一般应可在4℃存放3天以上。不同批试剂应检查反应到达终点时间、颜色稳定性及线性范围。 (3)如样品中胆固醇含量超出试剂线性范围(一般酶试剂测定范围应为5g/L以内),可用生理盐水稀释标本再测,结果须乘以稀释倍数。 (4)血清中胆红素0.1g/L以下、抗坏血酸0.05g/L以下及轻度溶血不至于影响结果。血清中其他类固醇含量甚微,不引起明显干扰。 (5)在仪器稳定及操作者熟练的情况下,批内CV<1%,批间CV<2%。 (6)由于纯胆固醇与血清胆固醇基质不同,反应速度不同,在酶法测定时如用纯胆固醇标准结果往往偏低。因此主张用标准参考血清做标准以达到与血清标本相同的反应,标准参考血清应用参考方法,以附合国际标准的纯胆固醇为标准标定。该标准血清可存放于-20℃保存1年。不宜反复冻融。