类型

血清

实验名称

总胆汁酸,total bile acids

关联实验

关联问题

实验理由

何时实验

患者准备

采样

采样原则

在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)作用下，各种胆汁酸C3上α位的羟基(3α-OH)脱氢形成羧基(3α-O)，同时氧化型NAD＋还原成NADH。随后，NADH的上氢由黄递酶催化转移给硝基四氮唑蓝(NTB)，用磷酸终止反应，生成物的产量与总胆汁酸成正比，在540nm波长比色。与同样处理的标准品比较，计算其含量。反应式如下：图1    

正常值描述

禁食，成人血清1～7μmol/L(3.5±1.75)。

疾病相关

肝损伤; 肝纤维化; 肝硬化

摘要

严格按试剂盒说明书进行，或参照表1操作。混匀，540nm波长比色，以相对应的B管调零，分别测定相应各管吸光度。

说明

(1)急性肝炎：急性肝炎时血清TBA显著增高，可达正常人水平的10～100倍，甚至更高。杨昌国等报道，60名健康对照者空腹TBA(F-TBA)含量为4.9±2.4μmol/L，中餐后2h血清TBA(P-TBA)含量为8.2±2.9μmol/L；34例急性肝炎急性期F-TBA为124.1±74.0μmol/L，P-TBA为152.2±73.0μmol/L，分别是正常上限的13倍和11倍，异常率为100%。急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值几乎与AST在同一时间降至正常水平，若持续不降或反而升高者则有发展为慢性的可能。有人对21例急性肝炎患者的随访研究发现，凡TBA恢复至10μmol/L以下者，一年后未发现有慢性转归病例，但TBA升高而AST降至正常者5例中有4例转为慢性肝炎。 (2)慢性肝炎：国外研究认为，在慢性肝炎患者中，若TBA水平超过20μmol/L，可考虑慢性活动性肝炎。国内杨昌国等报道，慢性迁延性肝炎p-TBA和F-TBA分别是23.6±12.5μmol/L和7.7±4.6μmol/L，而慢性活动性肝炎分别是111.3±45.1μmol/L和78.7±38.9μmol/L，慢性活动性肝炎的F-TBA和P-TBA均显著高于慢性迁延性肝炎。故血清TBA测定对慢性肝炎的鉴别以及监测慢性活动性肝炎的预后和治疗效果有重要意义。 (3)肝硬化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高幅度一般高于慢性活动性肝炎，即使在肝硬化的晚期亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶及碱性磷酸酶等指标转为正常，但血清TBA仍维持在较高水平上。 (4)乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高。当乙醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时，血清TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。也有人报道，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤诊断的可信度和灵敏度远远优于各种酶学检查和半乳糖耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β-氨基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。Sumino等报道，乙醇性肝病病人食入蛋黄后60min，血清TBA明显升高，并认为餐后60min-TBA测定对乙醇性肝病诊断更有意义。(5)中毒性肝病：血清TBA测定对中毒性肝病的诊断优于常规肝功能试验。有报道表明，在23例接触苯乙烯的工人中，11人血清TBA增高，而其他指标仅有3例异常。对临床服用某些治疗药物而致肝中毒引起的急性肝损伤也有诊断意义。 (6)胆汁淤积：血清TBA测定对胆汁淤积的诊断有较高灵敏度和特异性。肝外胆管阻塞及肝内胆汁淤积包括急性肝炎、初期胆管性肝硬化、新生儿胆汁淤积、妊娠性胆汁淤积等均可引起TBA增高。在胆管阻塞的初期，胆汁分泌减少，使血清中的TBA显著增高，且在阻塞的不同阶段几乎保持不变；而血清胆红素水平则随着不同阶段而变化。胆汁淤积患者肝组织中的胆汁酸含量明显高于正常人，CA增高8倍，CDCA增高4倍，DCA仅增加1.5%。肝外阻塞经过引流缓解后，血清TBA水平迅速下降，而其他指标则缓慢恢复正常。 在所有肝病中，餐后血清TBA水平及异常率均比空腹时高，故对肝病的诊断餐后TBA测定比空腹时测定更灵敏。有人报道，餐后测定TBA对各种肝病的诊断灵敏度和特异性高达100%，而同时测定空腹血清TBA有40%的患者在正常范围。急性肝炎是否转为慢性，连续监测餐后TBA水平可以观察慢性过程。慢性活动性肝炎是否发生肝纤维化改变，餐后连续监测也可以了解纤维化过程，不做肝活检即可获得肝损伤的程度。

结论有效原因

(1)血清中LD在其底物存在下(血清中含有一定量的乳酸)也可还原NAD＋为NADH，产生高空白值。本法中加入丙酮酸钠，抑制LD活性，可有效地降低空白吸光度。 (2)反应混合物中各成分浓度为： 3α-HSD5U/L 黄递酶 500U/L NAD＋   1mmol/L NTB    0.2g/L pH     7.50 (3)反应混合物的吸光度受蛋白质影响，故甘氨胆酸钠标准液配制于混合血清中。混合血清中原有胆汁酸及其他可能参与反应的物质需设P管消去。 (4)3α-HSD制品中含有二硫苏糖醇(di-thiothreitol，DTT)，酶制剂用量过多时可影响NTB的还原。 (5)本法线性达250μmol/L。如血清胆汁酸超过此值应作适当稀释。 (6)Noigen ET-180是一种非离子表面活性剂，化学名为聚氧乙烯油醚(polyoxy-ethyleneolylether)，为日本京都Dai-ichi Ko-gyo Seiyaku公司产，加入反应混合物中可防止沉淀，不影响3α-HSD及黄递酶活性，不影响本测定系统的敏感性。 (7)血清中的TBA含量较低，标本中含大量的干扰物质，其中最主要的是乳酸脱氢酶(LDH)。LDH能影响NAD＋的还原反应，由LDH生成的NADH往往比由3α-HSD催化TBA参与的反应生成的NADH量要大的多。由于各类肝炎均可引起血清LDH升高，因此测定中必须消除LDH的影响，方法有：血清67℃加温30min、加草酸作为LDH的封闭剂、碱或酸处理、或用丙酮酸钠抑制LDH活性等，其中以丙酮酸钠法最好。其它还原性物质的干扰通过设立双试剂，样品先和不加3α-HSD的体系孵育，使样品中的干扰物质反应，然后加入3α-HSD，使TBA反应，可排除干扰。