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血氨,Blood Ammonia
采样原则
血浆氨的酶法测定基于下列反应: 在过量α-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脱氢酶(GLDH)条件下,酶促反应的速率,即NAD(P)H转变成NAD(P)+使340nm吸光度的下降速率与反应体系中氨的浓度呈正比关系。
摘要
所用分光光度计需配有37℃恒温比色系统及340nm波长。如用自动分析仪,可根据本法反应条件自行设计,样品及试剂用量按比例减少。操作见表1,按B、S、U管先后顺序进行。
混匀,于10s时读A10s于70s时读A70s,求各管的△A,即△A=A10s-A70s。
说明
正常情况下,氨在肝脏中转变为尿素。严重肝脏疾病时,氨不能从循环中清除,引起血氨增高。高血氨有神经毒,引起肝性脑病(肝昏迷)。故成人血氨测定主要用于肝昏迷的监测和处理。此外,血氨测定对儿科诊断Reye综合征非常有用。该征有严重低血糖、大块肝坏死、急性肝衰,并伴有肝脂肪变性,在肝酶谱增高前,即见血氨增高。对诊断某些先天性代谢紊乱,如鸟氨酸循环的氨基酸代谢缺陷(高血氨)也很重要。
结论有效原因
(1)各试剂成分的终浓度:磷酸盐540mmol/L,α-酮戊二酸10mmol/L,NAD-PH 120μmol/L,ADP0.5mmol/L,GLDH16U/ml。(2)酶法测定血浆氨具有特异、简便、快速等优点,且可上自动分析仪。腺苷二磷酸(ADP)可稳定GLDH,增强反应速率。NADPH作辅酶较NADH可缩短反应时间,但前者价格更贵。(3)血浆中LDH、AST等也可利用NAD(P)H而产生内源性的消耗,直接影响血浆氨测定结果,起动剂α-酮戊二酸加入前37℃加温10min为NAD(P)H内源性消耗反应时间。(4)血浆氨测定的准确性在很大程度上取决于标本收集是否符合要求。用EDTA·Na2抗凝,静脉采血与抗凝剂充分混匀后立即置冰水中,尽快分离血浆,加塞置2~4℃保存,在2~3h内分析;-20℃可稳定24h,显著溶血者不能用,因红细胞中氨浓度为血浆的2.8倍。(5)线性范围0~150μmol/L,日常工作中可仅用100μmol/L标准应用液。(6)如测定值超出线性范围,可用去氨水稀释血浆后重作。(7)血氨含量甚微,要防止环境及所用各种器皿中氨的影响。(8)国内已有血浆氨酶法测定试剂盒,请按说明书操作。如中生公司的试剂盒,用三乙醇胺缓冲液,NADPH作辅酶,NADPH内源性消耗反应在室温中需反应20min。