3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法
来源
三部
分类
三部通则
内容
本法系依据可溶性糖经无机酸处理脱水产生糖醛(戊糖)或糖醛衍生物,生成物能与酚类化合物缩合生成有色物质,以此测定多糖的含量。
试剂 (1)0.1%三氯化铁盐酸溶液 准确称取三氯化铁FeCl3?6H2O)0.1g,放入清洁的试剂瓶内,加盐酸100ml,待溶解后置2~8°C冰箱保存。
(2)地衣酚(3,5-二羟基甲苯)乙醇溶液 称取地衣酚1g,放入10ml量瓶中,加95%乙醇至10ml。临用前配制。
(3)25μg/ml核糖对照品溶液
测定法 量取1ml水,加入5ml 0.1%三氯化铁盐溶液,混匀后再加入0.4ml地衣酚乙醇溶液,混匀。水浴5分钟后置冰浴,在波长670nm处测定吸光度,作为空白对照。
先将供试品用水稀释至核糖含量不高于25μg/ml,作为供试品溶液,量取1.0ml自“加5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液”起,同法操作。
分别取核糖对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于10ml试管中,每管依次加水0.9ml、0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0ml,自“加入5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液”起,同法操作。
结果计算 以核糖对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归,求得直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程,求出供试品溶液的核糖含量。
a×n
供试品多糖含量(μg/ml)= —————————
0.41
式中 a为供试品溶液的核糖含量,μg/ml;
n为供试品稀释倍数。

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