3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法
内容
本法系用分子排阻色谱法测定人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体含量。
照分子排阻色谱法（通则0514）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm，长60cm。以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液[量取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml，混匀]为流动相，检测波长为280nm，流速为每分钟0.6ml。分别取每1ml含蛋白质为12mg的人免疫球蛋白、人血白蛋白溶液各20μl，分别注入色谱柱，记录色谱图。人免疫球蛋白对照品单体峰与裂解体峰的分离度应大于1.5，人血白蛋白对照品单体峰与二聚体峰的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。
测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液，取20μl，注入色谱柱，记录色谱图60分钟。按面积归一法计算，色谱图中单体加二聚体峰的含量，即为IgG单体加二聚体含量。图谱各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。主峰为IgG单体；相对保留时间约0.85的峰为二聚体。