3403 免疫双扩散法,2015药典大全

3403 免疫双扩散法

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本法系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品的特异性进行检查。
供试品溶液的制备用生理氯化钠溶液将供试品的蛋白质浓度稀释至适当浓度。
试剂（1）0.5%氨基黑染色剂称取氨基黑10B 0.5g，加甲醇50ml、冰醋酸10ml与水40ml的混合液，溶解，即得。
（2）脱色液量取乙醇45ml、冰醋酸5ml与水50ml混合均匀，即得。
检查法将完全溶胀的1.5%琼脂糖溶液倾倒于水平玻板上（每平方厘米加0.19ml琼脂糖），凝固后，按下图打孔，直径3mm，孔距3mm（方阵型）。根据需要确定方阵型图数量。中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留1孔加入相应阳性对照血清。每孔加样20μl，然后置水平湿盒中，37℃水平扩散24小时。用生理氯化钠溶充分浸泡琼脂糖凝胶板，以除去未结合蛋白质。将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色。用脱色液脱色至背景无色，沉淀线呈清晰蓝色为止。用适当方法保存或复制图谱。

结果判定各阳性对照出现相应的沉淀线则试验成立，供试品与人血清（血浆）抗体之间应出现相应沉淀线，表示两者具有同源性。

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