内容
第一法 豚鼠毒素攻击法（仲裁法）
本法系用白喉毒素攻击经供试品与标准品分别免疫后的豚鼠，比较其存活率，计算出供试品的效价。
标准品和供试品溶液的制备 将标准品和供试品用生理氯化钠溶液按等比间隔稀释3~5个稀释度，使中间稀释度在攻毒后必须能保护约半数动物。
测定法 用稀释好的标准品和供试品溶液分别免疫250~350g同性别或雌、雄各半豚鼠，每个稀释度至少免疫10只。另取5只不免疫豚鼠同时饲养，作为对照。
免疫4周后，每只免疫豚鼠皮下注射100LD50白喉毒素1.0ml。对照组豚鼠注射经100倍稀释之上述毒素，每只皮下注射1.0ml。攻毒后观察5天，每日记录动物死亡情况。根据第5天存活率，以标准品的效价为标准，用平行线法计算供试品的效价。95%可信限应在效价的50%~200%，否则95%可信限的低限应大于相应品种中要求的效价规格。
【附注】试验成立的条件：
（1）供试品的最低稀释度能保护半数以上动物；
（2）供试品的最高稀释度能保护半数以下动物；
（3）对照组动物应部分死亡而不全部死亡；
（4）供试品和标准品的剂量反应曲线在平行性及直线性上的差异无显著意义。
第二法 小鼠-Vero细胞法
本法系用Vero细胞法测定经供试品与标准品分别免疫后的小鼠血清中的白喉抗毒素水平，计算供试品的效价。
试剂 （1）适宜培养液 临用时于培养液中加入新生牛血清、3%谷氨酰胺、青霉素、链霉素适量，使其终浓度分别为10%、0.03%、100IU/ml和100IU/ml。用7%碳酸氢钠溶液调pH值至7.0~7.2。
（2）无Ca2+、Mg2+缓冲液 称取氯化钠8.0g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.15g，加水溶解并稀释至1000ml。
（3）0.25%胰酶溶液 称取胰酶2.5g、乙二胺四乙酸二钠0.2g，用无Ca2+、Mg2+缓冲液溶解，并稀释至1000ml，用7%碳酸氢钠溶液调pH值至7.0。
Vero细胞悬液的制备 将Vero细胞培养于150cm2培养瓶中，待单层细胞长满至80%~100%时，弃去上层培养液，加入0.25%胰酶溶液10ml，置37℃消化数分钟，弃去胰酶，加入10ml培养液，分散细胞进行计数，用培养液调整细胞浓度至每1ml含2.5×105个细胞。
标准品及供试品溶液的稀释 用生理氯化钠溶液将吸附白喉类毒素的标准品和供试品分别以2倍系列稀释法稀释成3~5个适当稀释度。
测定法 （1）免疫与采血 用吸附白喉类毒素标准品和供试品的每一稀释度分别免疫10~14g同性别NIH小鼠8只，每只小鼠皮下注射0.5ml。免疫5周后，采血，分离血清，56℃、30分钟灭能，于-20℃保存。
（2）阳性对照小鼠血清 用含白喉类毒素成分的疫苗免疫1批小鼠，免疫5周后采血，分离血清，56℃、30分钟灭能，分装小管，冷冻，于-20℃保存。
（3）毒素试验量测定 Vero细胞测定白喉抗体试验时毒素浓度采用1/10000Lcd。
在96孔培养板中用MEM培养液将毒素做2倍系列稀释，每孔50μl，然后向各孔中加入标准白喉抗毒素（0.0001IU）50μl，加盖，室温放置1小时后，加入Vero细胞悬液50μl，加盖，用封板膜封板，于37℃二氧化碳孵箱培养6~7天后，观察结果，使细胞死亡的最大毒素稀释度（红色）即1/10000Lcd。
1/10000Lcd的毒素量相当于1×10-4Lf的毒素，适合本试验。
（4）抗体滴定 于96孔微量培养板中测定。
①向每孔加入50μl培养液，但A11、A12孔和H11、H12孔不加，而G11、G12孔加100μl培养液。
②取8份待检血清，分别加入A1至H1孔各50μl，横向做2倍系列稀释，直至A10和H10孔。
③将标准白喉抗毒素稀释至每1ml含0.008IU，加入A11、A12、B11和B12孔各50μl，从B11和B12孔开始竖向做2倍稀释至D11和D12孔。
④H11和H12孔加入阳性对照小鼠血清50μl。
⑤除G11和G12孔外，向其余各孔中加入毒素（1/10000Lcd）50μl，轻轻转动培养板，混匀，加盖后，置室温1小时.
⑥收集Vero细胞，进行计数，并稀释成每1ml含2.5×105个细胞的悬液。
⑦室温放置1小时的培养板，每孔立即加入50μlVero细胞悬液，加盖，用封板膜封板后，于37℃二氧化碳孵箱培养6~7天。
⑧取出培养板，根据培养液颜色变化记录结果，黄色为（+），红色（-），颜色不明显者则可用显微镜观察，如单层细胞完整无损为（+），否则记录（-）。最终结果用以2为底的指数表示，终点为变成黄色的最高稀释度孔的指数。例如变黄色的最后1孔稀释倍数是256，即为28，则结果记为8。
用平行线分析法进行结果计算。供试品和标准品的剂量反应曲线在平行性及直线性上的差异无显著意义。95%可信限应在效价的50%~200%，否则95%可信限的低限应大于相应品种中要求的效价规格。
【附注】试验要求：
（1）E11、E12、F11和F12孔代表毒素量和Vero细胞敏感度，应出现（-），如果出现（+），则毒素量和细胞敏感度都很低，应重试；
（2）细胞孔G11、G12和阳性对照孔H11、H12都必须是（+），如出现（-），应重试；
（3）如毒素用量准确（1/10000Lcd），则A11、A12和B11、 B12孔均应为（+），而C11、C12和D11、D12均应为（-），否则应重试；
（4）细胞计数应准确。