3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法(E玫瑰花环形成抑制试验)
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本法系依据抗人T细胞免疫球蛋白与人淋巴细胞E受体结合后,可阻止绵羊红细胞与淋巴细胞E受体特异性结合,根据其结合抑制率测定供试品抗人T淋巴细胞免疫球蛋白效价。
试剂 (1)淋巴细胞分离液(Ficoll's液)。
(2)Hank's液。
(3)20%胎牛血清Hank’s液 试验当天取适量灭菌的Hank’s液,加入经56℃、30分钟灭能及羊红细胞吸收过的胎牛血清,配成20%浓度。用0.5mol/L碳酸氢钠溶液或稀盐酸调pH值至7.2~7.4。
(4)1%羊红细胞悬液 颈静脉采羊血于Alsever’s液中,可保存2周。试验前取适量羊红细胞用生理氯化钠溶液洗3次,用20%胎牛血清Hank’s液配成1%羊红细胞悬液。
(5)淋巴细胞悬液 取肝素抗凝新鲜人静脉血加等量生理氯化钠溶液混匀后,缓慢加至等量淋巴细胞分离液液面上,以每分钟2000转离心20分钟,吸出淋巴细胞层细胞,加适量生理氯化钠溶液清洗,以每分钟1200转离心10分钟,弃上清液,沉淀加入适量20%胎牛血清Hank’s液,摇匀,为淋巴细胞原液;用1%醋酸蓝液将淋巴细胞原液稀释20倍,镜检计数淋巴细胞。根据计数结果,用20%胎牛血清Hank’s液将淋巴细胞原液稀释成每1ml含5×106个淋巴细胞,即为淋巴细胞悬液。
供试品溶液的制备 根据供试品效价,用20%胎牛血清Hank’s液将供试品稀释至几个适宜浓度。
测定法 取供试品溶液100μl,加入淋巴细胞悬液100μl,摇匀,置37℃水浴30分钟;加入1%羊红细胞悬液100μl,混匀,室温放置15分钟。以每分钟500转离心5分钟后置2~8℃过夜,每稀释度供试品溶液做2管。次日取出各管,加入当天稀释的0.2%台盼蓝溶液100μl,轻轻摇匀,镜检计数E玫瑰花环形成率(%)。取20%胎牛血清Hank’s液100μl,加入淋巴细胞悬液100μl,自“摇匀,置37℃水浴30分钟”起,同法操作,作对照组。计算E玫瑰花环抑制率(%),以E玫瑰花环抑制率在25%以上的供试品的最高稀释倍数为E玫瑰花环抑制效价。

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