不同浸种处理对阳春砂种子发芽的影响
分类
临床综合论文
内容
【关键词】 p2x7基因 单核苷酸多态性 白血病 急性 0 引言 p2x7基因位于12号染色体,有13个外显子,其编码产物是一种选择性离子通道型嘌呤能受体,在造血细胞及免疫细胞中介导atp诱导的细胞凋亡。发生在p2x7基因外显子13的单核苷酸多态性可以导致p2x7受体功能明显改变,其杂合性改变可使p2x7受体功能下降50%,而纯合性改变可使其功能完全丧失[1]。为探讨p2x7基因1513 a→c多态性在急性白血病中的意义,我们对24例急性白血病患者及42例正常对照进行了检测及分析。 1 材料与方法 1.1 病例 急性白血病患者24例,其中aml 15例,all 9例;男14例,女10例,中位年龄31岁。正常对照42例,男23例,女19例,中位年龄33岁。患者标本取自骨髓2毫升,对照者标本取自外周血5毫升。 1.2 方法 1.2.1 dna提取 常规酚/氯仿法提取基因组dna。 1.2.2 pcr扩增基因组dna 引物序列为:上游引物5’actcctagatccagggatagcc3’,下游引物5’ –tcactcttcggaaactcttt cc3’。www.11665.com每份样本反应体系为25μl,组成如下:10×缓冲液2.5μl,4×dntp (20mm) 0.25μl,上游引物及下游引物各0.5μm,mgcl2(50mm) 0.75μl,ampli taq gold dna聚合酶(applied biosystem)1.25u, dna 25ng。pcr条件为:预变性95℃ 5分钟; 变性94℃ 1分钟,退火62℃ 1分钟,延伸72℃ 1分钟,33个循环;最后72℃延伸10分钟。 1.2.3 测序 应用bigdye terminator sequencing kit(abi,usa)及abi 3100型dna测序仪进行双向dna测序。 1.3 统计学分析 fisher’s exact test。 2 结果 测序结果见图1所示。3例白血病患者基因型为a/c,其中aml 2例,all 1例。患者与正常对照c等位基因频率的差异有显著性(p=0.046), 见表1。 图1 dna测序结果:从上至下分别 为a/a、a/c及c/c基因型 3 讨论 p2x7基因的外显子12及13编码一个长达240个氨基酸的细胞内c末端,这一结构与其功能密切相关。一般认为p2x7受体可介导细胞凋亡,但也有学者发现该受体同时具有诱导凋亡及促进增殖两种作用[1,2]。adinolfi等[3]报道p2x7受体在进展性cll(chronic lymphocytic leukemia, 慢性淋巴细胞白血病)的表达明显高于惰性cll,提示p2x7在高表达时有促进细胞增殖的作用。wiley等[4]报道p2x7基因1513a→c多态性在cll患者中的阳性率是正常对照的3倍,提示c等位基因可能与cll的发生有密切关系。但thunberg等[5]发现cll患者该snp阳性率低于正常对照,且阳性者的生存期较阴性者显著延长,提示c等位基因是预后良好的因素。我们的研究结果显示在这一组急性白血病患者中p2x7基因1513a→c阳性率明显低于正常对照,与thunberg的研究结果相似。本研究结果提示在急性白血病中p2x7受体可能主要发挥促进细胞增殖作用,而p2x7基因1513a→c多态性可能与急性白血病的发生呈负相关。 【参考文献】 [1] gu bj,zhang w,worthington ra,et al. a glu496 to ala polymorphism leads to loss of function of the human p2x7 receptor[j]. j biol chem,2001,276(14):1113511142. [2] baricordi or,melchiorri l,adinolfi e,et al. increased proliferation rate of lymphoid cells transfected with the p2x(7) atp receptor[j]. j biol chem,1999,274(47):3320633208. [3] adinolfi e,melchiorri l,falzoni s,et al. p2x7 receptor expression in evolutive and indolent forms of chronic b lymphocytic leukemia[j]. blood,2002,99(2):706708. [4] wiley js,dao-ung lp,gu bj,et al. a loss-of-function polymorphic mutation in the cytolytic p2x7 receptor gene and chronic lymphocytic leukaemia: a molecular study[j]. lancet,2002,359(9312),11141119. [5] thunberg u,tobin g,johnson,et al. polymorphism in the p2x7 receptor gene and survival in chronic lymphocytic leukaemia[j]. lancet,2002,360(9349):19351939.
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