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【关键词】 免疫组化 骨肉瘤 环氧化酶2 血管内皮细胞生长因子 骨桥蛋白 0 引言 有研究表明，opn是细胞外基质中一种主要的蛋白质，在生物体内肿瘤生长过程中新生血管形成机制中起重要作用。opn的受体和血管重建关系密切，整合素ανβ3和opn的共同表达可以刺激内皮细胞的迁移。cox2是前列腺素合成过程中的关键限速酶，在肿瘤细胞中均有高表达[1]。本研究采用sp免疫组织化学方法检测opn、cox2在骨肉瘤和良性骨肿瘤组织病理切片中的表达，同时分析57例骨肉瘤和11例良性骨肿瘤患者的临床资料，以探讨两者与骨肉瘤发生、发展的关系及其临床意义。 1 资料与方法 1.1 资料 选取1997～2004年华中科技大学同济医学院附属同济医院提供的57例行手术切除且保存完好的骨肉瘤组织的石蜡标本（均为原位癌），其中男36例，女21例，年龄6～65岁，平均年龄21岁。同时选取11例良性成骨性肿瘤和5例正常骨塑形部位的石蜡标本作对照。随访时间为8月～7.5年（平均3年），在此期间，20例发生了肺转移，3例复发，23例死亡。wwW.11665.COm 1.2 免疫组织化学方法 采用sp免疫组织化学染色方法，opn和cox2单克隆抗体均购于北京中山生物技术公司，工作浓度为1∶100。以pbs代替一抗，作空白对照，以正常骨组织作阴性对照。 1.3 结果判定 用乳腺癌组织的阳性切片作阳性对照，以pbs置换一抗作阴性对照，胞浆中见清晰棕色颗粒者为阳性细胞。高倍镜下观察5个视野计数，按阳性细胞所占比例分为：+，阳性细胞 25%，++，阳性细胞数为25%～50%，+++，阳性细胞 50%，以细胞无棕色或背景一致为阴性。 1.4 统计学方法 所有结果采用spss10.0统计软件包进行卡方检验，相关性采用spearman等级相关分析。检测水准为α=0.05。 2 结果 在骨再造塑形组织中：opn无染色或染色极淡，衬细胞无阳性染色；而cox2在许多间质细胞如成骨细胞，破骨细胞和内皮细胞均有表达。 在良性成骨性肿瘤中：opn可见局灶性染色，阳性细胞数为5～20%（均数为10%，标准差6.81）；cox2可见广泛染色，且较opn染色强，每个切片约有80%阳性肿瘤细胞染色，标准差为1。 在骨肉瘤组织中：opn呈斑片状染色，阳性细胞数为0～60%（均为7%，标准差12.75)；cox２染色明显，阳性细胞数为５～９０％（均数６０％，标准差２３．９７）。 ３ 讨论 我们的研究表明，opn在单核细胞和巨噬细胞中有不同程度的表达，不管是良性成骨性肿瘤还是骨肉瘤组织中，opn均呈斑片状分布。opn作为主要的骨基质蛋白，在骨沉积部位和矿化的板层骨中亦有表达，这个结果与dodds等[2]的研究结果一致。opn在肿瘤组 织中的表达较正常组织上调，而且可以用免疫组织化学方法检测。 cox2诱导肿瘤细胞即单核巨噬细胞等产生vegf[3]，肿瘤组织内缺氧诱导cox2促进肿瘤血管生成[4]。 nemoto等[5]设计了opn缺乏小鼠动物模型，注射了黑色素瘤细胞的小鼠在骨和肺组织中形成的肿瘤数较野生型显著减少，表明opn与肿瘤的发生和迁移有关。在人类肿瘤中opn的临床意义也有较多研究。如乳腺癌患者较正常女性的opn血浆水平显著提高，而且随着opn血浆水平升高，转移率增加，存活率减少[6]。 我们的研究提示opn蛋白在大多数骨肿瘤切片中都有表达，而在骨再造塑形组织切片中无表达，因此，骨肿瘤组织中opn的表达上调就要高度关注，怀疑恶变可能。尽管cox2和opn在骨肉瘤组织中的表达有相关性，而且cox2可以作为骨肉瘤患者的预后标志物，但本研究尚不能说明opn的表达与骨肉瘤的预后明显有关。 【参考文献】 ［1］ 高雪芹，韩金祥. 环氧化酶2研究的历史回顾与启示[j]. 医学与哲学，2005,26(1):2829. ［2］ dodds ra, connor jr, james ie, et al. human osteoclasts, not osteoblasts, deposit osteopontin onto resorp;tion surfaces: an in vitro and ex vivo study of remodeling bone[j]. j bone miner res, 1995,10(11):16661680. ［3］ 高雪芹，张维东，蔡生业. 非甾体类抗炎药抗癌作用研究进展[j]. 国外医学肿瘤分册，1999，26（4）：211213. ［4］ 牛新捷，王作仁. 环氧化酶2与血管生成的关系[j]. 国外医学生理病理科学与临床手册， 2002， 22（1）：5961. ［5］ nemoto h, rittling sr, yoshitake h, et al. osteopontin deficiency reduces experimental tumor cell metastasis to bone and soft tissues[j].j bone miner res, 2001,16(4):652659.