内容
作者：吴义忠，朱焕容，许丽芬
【摘要】 目的 建立止嗽丸中甘草苷的含量测定方法。方法 采用hplc法，色谱柱：hypersil c18柱(5 μm;4.0 mm×250 mm):流动相: 乙腈0.5％冰醋酸（体积比20∶80）；流速:1.1 ml/min；检测波长:276 nm；柱温:30 ℃；进样量:10 μl。结果 甘草苷在0.020～2.001 μg范围内与峰面积呈良好的线形关系：r=1.000，平均回收率98.7%，rsd为0.38%。结论 所建立的方法简便可行、重现性好、可作为止嗽丸质量控制的方法。
【关键词】 止嗽丸 hplc 甘草苷 质量标准
止嗽丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第一册(1989)，由紫菀（制）、白前、甘草等七味中药组成，具有止咳去痰、疏风理肺之功效，用于风邪犯肺、咳嗽咽痒、痰不易咯出者。原质量标准中，只有性状和检查项，无其他检验项目。本文采用hplc法对处方中甘草所含甘草苷进行含量测定，以便对该制剂进行质量控制。wWW.11665.COM
1 仪器与试药 lc20a高效液相色谱仪，可变紫外检测器(日本岛津)。 甘草苷对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号：111610200503）；止嗽丸为实验室样品；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:hypersil c18柱(5 μm;4.0 mm×250 mm):流动相: 乙腈0.5％冰醋酸（体积比20∶80）；流速1.1 ml/min；检测波长276 nm；柱温30 ℃；进样量:10 μl。
2.2 对照品溶液的制备 取甘草苷对照品适量，加体积分数70％乙醇制成每1 ml含20 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数70％乙醇100 ml，称定重量，超声处理30 min，取出，再称定重量，用体积分数70％乙醇补足减失的重量，滤过，即得。
2.4 方法的专属性考察 在上述的色谱条件下，将甘草苷对照品溶液、供试品溶液、甘草阴性对照溶液注入液相色谱仪中，得hplc图（见图1），结果显示阴性对照无干扰。
a.甘草苷对照品; b.止嗽丸样品; c.甘草阴性对照
图1 hplc图谱（略）
figure 1 hplc chromatograms
2.5 线性关系的考察 精密称取甘草苷对照品适量，加流动相制成每1 ml分别含甘草苷2.001、4.002、10.00、20.01、40.02、200.1 μg的溶液，分别吸取10 μl进样测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程:y=29543x+144.52，r=1.000。表明甘草苷进样量在0.020～2.001 μg范围内与峰面积呈良好的线形关系。 2.6 精密度试验 分别取对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积，计算得甘草苷的峰面积rsd分别为0.4%。
2.7 重复性试验 精密称取同一批号样品，按供试品溶液制备方法平行制备5份，依法测定，计算甘草苷含量rsd值为0.6%。
2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，于0、2、3、4、6、8、11、24 h进样测定，计算得甘草苷的峰面积的rsd为1.0%,表明样品溶液在24 h内稳定。
2.9 加样回收率试验 分别精密称取已知含量（含量为1.312 mg/g）的本品适量6份，分别精密加入甘草苷对照品溶液（0.200 1 mg/ml）各3 ml，按”2.3”项下方法制得供试品溶液。分别吸取上述供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定其中甘草苷的总量，与止嗽丸中应含有的甘草苷总量进行比较，计算回收率，结果见表1。
表1 甘草苷回收率试验测定结果（略）
table 1 results of recovery test
2.10 样品测定 分别精密称取不同批号的止嗽丸适量，按“2.3”项下方法制备溶液，按“2.1”项下色谱条件进行hplc分析，结果3个批号的样品所测得的平均含量为1.312、1.323、1.298 mg/g。
3 讨论 甘草中的黄酮类成分具有抗氧化、抗病毒、抗炎、抗溃疡作用［１］。甘草苷是甘草的黄酮类成分之一，也是止嗽丸治疗疾病的活性成分，故选择甘草苷作为该制剂的定量指标。 通过参考文献［2-5］并进行实验，选用乙腈0.5％醋酸(体积比1∶4)为流动相，能很好地将甘草样品中的甘草苷分离出来。 甘草苷可溶于乙醇、甲醇和水等溶剂，但因溶剂极性的不同，其溶解度也不同，参考《中国药典》2005年版一部甘草项下甘草苷的提取方法，选用体积分数70％乙醇作为提取溶剂［2］，提取效率高。另外，对照品及阴性对照的制备同样采用体积分数70％乙醇为溶剂，确保与供试品平行一致，且该溶剂低毒环保。 本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为止咳丸的质量控制方法。
【参考文献】 ［1］ 贾国惠，贾世山．甘草中黄酮的药理作用研究进展［j］．中国药学杂志，1998，33(9)：513-514. ［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［m］.北京：化学工业出版社，2005：60. ［3］ 李仁秋.高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量［j］. 云南中医中药杂志，2008，29（2）：35-36. ［4］ 闫永红，王文全，杨娜.hplc测定栽培甘草中甘草苷的含量［j］. 中国中药杂志，2006，31（11）：926-927. ［5］ 伍蔚萍，阎宏涛，孙文基.hplc法测定甘草中甘草苷的含量［j］.药物分析杂志，2004，24(4)：425-427.