内容
作者：简柳清，曾赟昀，刘声波，曹艳芳，谭载友
【摘要】 目的 建立止咳枇杷颗粒中薄荷脑的测定方法。方法 采用气相色谱法，色谱柱为wax10毛细管柱（0.32 mm×30 m×0.25 μm），柱温为110 ℃，进样口温度为250 ℃，检测器温度为250 ℃；fid检测器。结果 薄荷脑在0.051 7～0.668 3 mg/ml范围内线性关系良好（r=1.000 0），平均回收率为101.1%，rsd为2.0%（n=6）。结论 该法简便、准确，适用于止咳枇杷颗粒中薄荷脑的测定。
【关键词】 止咳枇杷颗粒 薄荷脑 气相色谱法
止咳枇杷颗粒由枇杷叶、桑白皮、白前、百部、桔梗、薄荷脑、蔗糖等制成，具有清肺、止咳、化痰的功效，用于咳嗽多痰、支气管炎等。现行的部颁标准中药成方剂第二册ws3—b—0212—90质量标准中收载了该制剂，只作了定性鉴别，无定量检测方法。本文应用毛细管气相色谱法测定止咳枇杷颗粒中薄荷脑的含量，为止咳枇杷颗粒的质量控制提供依据。
1 仪器与材料 gc2010气相色谱仪（日本岛津）；gcsolution 气相色谱工作站；spl毛细管柱进样口；wax10毛细管柱（supel co公司）（0.32 mm×30 m×0.25 μm）。WwW.11665.CoM 止咳枇杷颗粒（广州奇星药业有限公司），薄荷脑对照品（072800005，中国药品生物制品检定所）；水杨酸甲酯（110707200609，内标用，中国药品生物制品检定所），其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱： wax10毛细管柱（0.32 mm×30 m×0.25 μm），柱温为110 ℃，进样口温度为250 ℃，检测器温度为250 ℃；fid检测器。载气为高纯度氮气，流速：1.0 ml/min，进样量为1 μl。薄荷脑、水杨酸甲酯（内标）的理论塔板数不低于5000。色谱图见图1。
a.薄荷脑对照品; b.样品; c.阴性样品
图1 气相色谱图（略）
figure 1 gas chromatograms
2.2 样品测定方法
2.2.1 内标溶液的制备 精密称取水杨酸甲酯适量，置500 ml量瓶中，用无水乙醇配制成0.223 9 mg/ml的溶液，摇匀，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取薄荷脑66.83 mg，置50 ml量瓶中，加内标溶液溶解并定容，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5 ml，置20 ml量瓶中，加内标溶液溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，精密称取本品5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液20 ml，超声20 min，取上清液用滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.2.4 测定方法 分别精密吸取对照品和供试液各1 μl，注入气相色谱仪，测定薄荷脑对照品和水杨酸甲酯峰面积，计算校正因子，按内标法计算即得。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系考察 精密吸取上述薄荷脑对照品储备液适量，用内标溶液制成薄荷脑质量浓度分别为0.668 3、0.528 3、0.325 1、0.261 2、0.103 9、0.051 7 mg/ml的系列溶液（内标溶液质量浓度为0.223 9 mg/ml），分别吸取上述溶液1 μl注入气相色谱仪，记录色谱图，以薄荷脑质量浓度为横坐标，以薄荷脑峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=0.7134x+0.00005，r=1.000 0（n=6），结果表明薄荷脑在0.051 7～0.668 3 mg/ml范围内线性关系良好。
2.3.2 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、24 h进样测定，结果薄荷脑平均质量分数为0.1010%，rsd为0.30%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.3.3 精密度试验 取同一份供试品溶液，重复进样6次，结果供试品中薄荷脑平均质量分数为0.1009%，rsd为0.30%（n=6）。
2.3.4 加样回收率试验 取已知含量的样品6份，每份约2.5 g，精密称定，分别精密加入上述对照品储备液适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，依次测定，测得平均回收率为101.1%，rsd为2.0%，见表1。
2.3.5 重复性试验 取同一批号的止咳枇杷颗粒6份，按“2.2”测定方法测定含量，6份样品的薄荷脑含量的rsd为1.8%，表明本方法重复性较好。
2.4 样品测定 取3批样品，按照“2.2.3”项的方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件下进行测定，3批样品的质量分数分别为0.1089%、0.1125%、0.1250%。
表1 止咳枇杷颗粒加样回收率试验（略）
table 1 recovery of zhike pipa granule
3 讨论
3.1 色谱条件的选择 参考文献［1］，采用柱温：150 ℃、fid检测器温度：190 ℃、进样口温度：190 ℃的条件，薄荷脑峰与杂质峰分不开。参照部颁标准［４］改为柱温：110 ℃、fid检测器温度：250 ℃、进样口温度：250 ℃，薄荷脑峰和杂质峰分离良好。
3.2 提取溶剂的选择 参考文献［1～3］选用无水乙醇为提取溶剂，水杨酸甲酯为内标物。
3.3 提取方法的选择 比较了无水乙醇加热回流提取和超声提取2种方法对薄荷脑的提取效果，结果表明加入20 ml内标溶液回流0.5 h与加入20 ml内标溶液超声提取效果基本一致，薄荷脑质量分数分别为0.1002%和0.0972%，rsd为2.0%。考虑到超声20 min提取方法方便、快捷，为节约时间和成本，采用超声20 min的方法作为提取方法。
3.4 色谱柱的选择 比较wax10毛细管柱和at1毛细管柱的分离效果，结果wax10毛细管柱气相色谱的峰形和出峰时间比较适中，而at1不理想。
【参考文献】 ［1］ 张雪，邵燕虹，张慧敏.气相色谱法测定苍耳子鼻炎胶囊中薄荷脑和龙脑的报告［j］.医学综述，2008，14（20）：7913-7914. ［2］ 杨敏，刘吉金.气相色谱法测定蜜炼川贝枇杷膏中薄荷脑和苯甲醛的含量［j］.中国实验方剂学杂志，2008，14（8）：32-42. ［3］ 陈月英，莫云燕，林子夏，等.毛细管气相色谱法测定止痒灵中的苯酚和薄荷脑［j］.广东药学院学报，2007，23（2）：245-246. ［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方剂第二册［m］.北京：化学工业出版社，2002：216.
2.3.2 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、24 h进样测定，结果薄荷脑平均质量分数为0.1010%，rsd为0.30%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.3.3 精密度试验 取同一份供试品溶液，重复进样6次，结果供试品中薄荷脑平均质量分数为0.1009%，rsd为0.30%（n=6）。
2.3.4 加样回收率试验 取已知含量的样品6份，每份约2.5 g，精密称定，分别精密加入上述对照品储备液适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，依次测定，测得平均回收率为101.1%，rsd为2.0%，见表1。
2.3.5 重复性试验 取同一批号的止咳枇杷颗粒6份，按“2.2”测定方法测定含量，6份样品的薄荷脑含量的rsd为1.8%，表明本方法重复性较好。
2.4 样品测定 取3批样品，按照“2.2.3”项的方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件下进行测定，3批样品的质量分数分别为0.1089%、0.1125%、0.1250%。
表1 止咳枇杷颗粒加样回收率试验（略）
table 1 recovery of zhike pipa granule
3 讨论
3.1 色谱条件的选择 参考文献［1］，采用柱温：150 ℃、fid检测器温度：190 ℃、进样口温度：190 ℃的条件，薄荷脑峰与杂质峰分不开。参照部颁标准［４］改为柱温：110 ℃、fid检测器温度：250 ℃、进样口温度：250 ℃，薄荷脑峰和杂质峰分离良好。
3.2 提取溶剂的选择 参考文献［1～3］选用无水乙醇为提取溶剂，水杨酸甲酯为内标物。
3.3 提取方法的选择 比较了无水乙醇加热回流提取和超声提取2种方法对薄荷脑的提取效果，结果表明加入20 ml内标溶液回流0.5 h与加入20 ml内标溶液超声提取效果基本一致，薄荷脑质量分数分别为0.1002%和0.0972%，rsd为2.0%。考虑到超声20 min提取方法方便、快捷，为节约时间和成本，采用超声20 min的方法作为提取方法。
3.4 色谱柱的选择 比较wax10毛细管柱和at1毛细管柱的分离效果，结果wax10毛细管柱气相色谱的峰形和出峰时间比较适中，而at1不理想。
【参考文献】 ［1］ 张雪，邵燕虹，张慧敏.气相色谱法测定苍耳子鼻炎胶囊中薄荷脑和龙脑的报告［j］.医学综述，2008，14（20）：7913-7914. ［2］ 杨敏，刘吉金.气相色谱法测定蜜炼川贝枇杷膏中薄荷脑和苯甲醛的含量［j］.中国实验方剂学杂志，2008，14（8）：32-42. ［3］ 陈月英，莫云燕，林子夏，等.毛细管气相色谱法测定止痒灵中的苯酚和薄荷脑［j］.广东药学院学报，2007，23（2）：245-246. ［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部部颁标准中药成方剂第二册［m］.北京：化学工业出版社，2002：216.