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马鞭草抗乙肝有效部位化学成分研究

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药学论文

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作者：陈丽花,李志军,王定勇
【摘要】　　目的研究马鞭草( verbena officinalis l.)抗乙肝有效部位的化学成分。方法采用柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用ir、esims、1hnmr、13cnmr等波谱技术鉴定结构。结果分离并鉴定了6个化合物，分别为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)。结论首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3、6为首次从该植物中分离得到。
【关键词】马鞭草杨梅素抗乙肝作用
　abstract:objective to study the chemical constituents in the antihbv active fraction of verbena officinalis. methods the constituents were separated and purified by column chromatography and thin layer chromatography,and their structures were elucidated by ir,ms,1hnmr and 13cnmr. results six compounds were isolated from the effective fraction of verbena officinalis: kaempferol (1),quercetin (2),myricetin (3),ursolic acid (4),verbenalin (5) and myricetrin (6). conclusions chemical constituents in the antihbv active fraction of verbena officinalis were first reported. compounds 3 and 6 were obtained from this plant for the first time.
　　key words:verbena officinalis; chemical constituents; myricetin; antihepatitis b virus
　　马鞭草(verbena officinalis l.)为马鞭草科(verbenaceae)多年生草本植物，始载于《名医别录》，民间以其全草或带根全草入药。wwW.11665.cOm马鞭草作为传统中药，具有清热解毒、消肿利尿、活血通经等功效，广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等证[1]。现代研究表明，马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(hbv)和hbsag，并能抗乙肝纤维化[2-3]。利用酶联免疫吸附检测(elisa)技术[4]，作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位。为阐明其药效物质基础，本文对该有效部位进行系统的化学成分研究，从中分离得到6个化合物，分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)，其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到。
　　 1 仪器与材料
　　熔点用xrc1显微熔点仪(四川大学科仪厂制造)测定,温度计未校正;红外光谱用 nicolet protg460 光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用bruker am500 型核磁共振仪测定,tms为内标;esims 在 hp1100 lc/ ms上测定。柱色谱用硅胶(200～300目)、薄层色谱用硅胶(10～40 μm)均为青岛海洋化工厂生产，sephadex lh20为美国ge公司产品，ods为日本ymc产品。马鞭草于2008年8月采自广东省广州市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(verbena officinalis l.)。
　　 2 提取与分离
　　取阴干的马鞭草10 kg，粉碎至约60目，用适量甲醇室温浸泡3次,每次7 d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280 g。取该提取物250 g分散于适量热水中再转移至2 500 ml分液漏斗,依次用石油醚、chcl3萃取3次(每次用1 000 ml溶剂)，除掉极性小的化学成分,再用etoac萃取3次(每次用1 000 ml),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35 g。elisa法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]。有效部位经硅胶柱层析(200～300目)，三氯甲烷甲醇系统(体积比20∶1～0∶1) 梯度洗脱。tlc检测，合并相同组分，共得到7个部分;各部分再经sephadex lh20柱层析[洗脱剂为甲醇水(体积比3∶2)]、ods柱层析[洗脱剂为乙腈水(体积比1∶1)]、制备薄层层析(展开剂为氯仿甲醇体系)等反复分离纯化，得到化合物1(20 mg)、2 (38 mg)、3 (15 mg)、4 (30 mg)、5 (55 mg)和6 (10 mg)。　　3 结构鉴定
　　化合物1：黄色粉末，mp 275.0～276.5 ℃。hclmg试验显阳性。esims(m/z): 287.0 [m+h]+。1hnmr(500 mhz,dmsod6) δ: 12.18 (1h,s,5oh),8.15 (2h,d,j=8.5 hz,h2′,6′),7.02 (2h,d,j=8.5 hz,h3′,5′),6.55 (1h,d,j=2.0 hz,h8),6.27 (1h,j=2.0 hz,h6)。13cnmr (125 mhz,dmsod6 ) δ: 146.9 (c2),133.5 (c3),176.5 (c4),162.2 (c5),99.0 (c6),164.9 (c7),94.3 (c8),157.6 (c9),103.9 (c10),123.1 (c1’),130.3 (c2′,6′),116.2 (c3′,5′),160.1 (c4′)。以上波谱数据与文献[5]报道的山柰酚一致。
　　化合物2：黄色粉末，mp 303.0～304.5 ℃。hclmg试验显阳性。esims(m/z): 325.0 [m+na]+。1hnmr (500 mhz,dmsod6) δ : 12.20 (1h,s,5oh),7.80 (1h,d,j=1.8 hz,h2′),7.68 (1h,dd,j=8.6,1.8 hz,h6′),6.98 (1h,d,j=8.6 hz,h5′),6.51 (1h,j=2.0 hz,h8),6.26 (1h,j=2.0 hz,h6)。13cnmr (125 mhz,dmsod6 ) δ : 146.8 (c2),136.5 (c3),176.6 (c4),157.5 (c5),99.1 (c6),164.8 (c7),94.3 (c8),162.6 (c9),104.0 (c10),123.6 (c1′),115.6 (c2′),145.7 (c3′),148.1 (c4′),116.0 (c5′),121.3 (c6′)。以上波谱数据与文献[5]报道的槲皮素一致。
　　化合物3：棕黄色针晶(meoh),mp 324.0～325.5 ℃。hclmg试验显阳性。esims(m/z): 319.3 [m+h]+。 ir (kbr) νmax/cm-1: 3 350,
　　3 028,1 660,1 609,1 544, 1 447,1 316,1 245, 1 200, 1 163,1 113,1 095,1 026,939。1hnmr (500 mhz,dmsod6) δ : 12.50 (1h,s,5oh),7.25 (2h,s,h2′,6′),6.37 (1h,d,j=2.0 hz,h6),6.17 (1h,j=2.0 hz,h6)。13cnmr (125 mhz,dmsod6 ) δ : 147.3 (c2),136.5 (c3),176.2 (c4),161.2 (c5),98.6 (c6),164.8 (c7),93.8 (c8),156.6 (c9),103.4 (c10),121.2 (c1′),107.7 (c2′,6′),146.2 (c3′,5′),136.5 (c4′)。以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅素一致。
　　化合物4：白色针状晶体(etoac)，mp 285.6～287.0 ℃，硫酸香兰醛显紫色。esims(m/z): 455.2 [mh]-。1hnmr (500 mhz,cdcl3) δ : 5.13 (1h,t,j=3.6 hz,12h),3.75 (1h,dd,j=10.4,4.6 hz,3h),0.68 (3h,s),0.75 (3h,s,me),0.87 (3h,s,me),0.89 (3h,s,me),1.05 (3h,s,me),0.80 (3h,d,j=6.5 hz,me),0.92 (3h,d,j=6.3 hz,me)。13cnmr (125 mhz,chcl3) δ : 38.3 (c1),26.9 (c2),76.8 (c3),38.7 (c4),54.8 (c5),18.0 (c6),32.7 (c7),39.0 (c8),40.1 (c9),36.5 (c10),22.8 (c11),124.5 (c12),138.1 (c13),41.6 (c14),27.5 (c15),23.8 (c16),46.8 (c17),52.3 (c18),38.5 (c19),38.4 (c20),30.2 (c21),36.3 (c22),28.2 (c23),15.2 (c24),16.0 (c25),16.8 (c26),23.2 (c27),178.1 (c28),16.9 (c29),21.0 (c30)。以上波谱数据与文献[7]报道的熊果酸一致。
　　化合物5：无色针状晶体(meoh)，mp 181.5～183.0 ℃。esims(m/z): 389.1 [m+h]+。1hnmr (500 mhz,cd3od) δ : 1.22 (3h,d,j=6.7 hz,h10),2.01 (1h,dd,j=4.0,18.3 hz,h7α),2.21 (1h,m,h9),2.48 (1h,m,h8),2.54 (1h,dd,j=8.0,18.3 hz,h7β),3.62 (1h,dd,j=5.6,12.0 hz,h5),5.22 (1h,d,j=7.2 hz,h1),7,45 (1h,s,h3),3.58 (3h,s,11och3),4.64 (1h,d,j=7.8 hz,h1′),3.23 (1h,dd,j=9.0,7.8 hz,h2′),3.36 (1h,t,h3′),3.28 (1h,m,h4′),3.27 (1h,m,h5′),3.84 (1h,dd,j=11.4,0.6 hz,h6′a),3.63 (1h,dd,j=11.4,5.4 hz,h6′b)。13cnmr (125 mhz,cd3od) δ : 97.5 (c1),153.8 (c3),105.4 (c4),43.5 (c5),215.8 (c6),43.7 (c7),29.8 (c8),45.5 (c9),20.6 (c10),169.1 (c11),51.9 (11och3),100.5 (c1′),74.8 (c2′),77.9 (c3′),71.5 (c4′),78.5 (c5′),62.7 (c6′)。以上波谱数据与文献[8]报道的马鞭草苷一致。
　　化合物6：黄白色片状结晶(meoh),mp 182.5～184.0 ℃。hclmg试验和molish试验均显阳性。esims(m/z): 465.3 [m+h]+。ir (kbr) νmax/cm-1: 3 401, 2 928, 1 655, 1 606, 1 458, 1 345,
　　1 290,1 201,1 165,1 075,1 040,969,917。1hnmr (500 mhz,dmsod6) δ: 12.68 (1h,s,5oh),6.88 (2h,s,h2′,6′),6.36 (1h,d,j=2.1 hz,h6),6.20 (1h,j=2.1 hz,h6),5.21 (1h,brs,h1″),3.76 (1h,brs,h2″),3.56 (1h,dd,j=9.4,2.9 hz,h3″),3.16 (1h,t,j=9.5 hz,h4″),3.98 (1h,brs,h5″), 0.85 (3h,d,j=6.1 hz,h6″)。 13cnmr (125 mhz,dmsod6) δ : 156.8 (c2),134.5 (c3),178.2 (c4),161.9 (c5),99.1 (c6),164.7 (c7),94.0 (c8),158.0 (c9),104.4 (c10),121.1 (c1′),108.2 (c2′,6′),146.2 (c3′,5′),136.8 (c4′),102.5 (c1″),70.8 (c2″),71.1 (c3″),71.7 (c4″),70.5 (c5″),18.0 (c6″)。以上波谱数据与文献[6]报道的杨梅苷一致。
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