内容
【摘要】 目的 测定清瘟解毒片中芍药苷的含量。方法 采用反相高效液相色谱法，diamonsilc18柱，甲醇0.05 mol/l kh2po4(体积比30∶70)为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长230 nm，柱温为室温。结果 芍药苷质量浓度在4.95～59.4 μg/ml间具有良好的线性关系(r=0.999 7)，芍药苷平均回收率为104.1%，方法精密度(rsd)为0.90%(n=6)。结论 该法可用于清瘟解毒片中芍药苷的含量测定。
【关键词】 清瘟解毒片;芍药苷;高效液相色谱法;含量测定
abstract:objective to determine the content of paeoniflorin in qingwen jiedu tablets.methods rphplc method for the determination of paeoniflorin in qingwen jiedu tablets was established. the chromatographic column was diamonsilc18. the mobile phase was methanol0.05 mol/l kh2po4(30∶70). the flow rate was 1.0 ml·min-1,and the detection wavelength was 230 nm. the column temperature was 25℃.results the linear range of paeoniflorin was 4.95～59.4 μg/ml(r=0.999 7). the average recovery for paeoniflorin was 104.1%,precision of the method was 0.90% (rsd,n=6).conclusion the method can be used in assay of paeoniflorin of the preparation.
key words:qingwen jiedu tablets;paeoniflorin;rphplc;assay
清瘟解毒片是由天花粉、葛根、白芷、玄参、赤芍等16味中药制成的中药成方制剂，具清瘟解毒之功效。www.11665.CoM临床用于治疗感冒、发热、怕冷、无汗头痛、口渴咽干、四肢酸痛、痄腮肿痛。该产品现行标准[1]采用hplc法测定黄芩苷含量，有文献报道用高效液相色谱法测定该制剂中葛根素的含量[2]，但芍药苷含量测定未见文献报道。为进一步评价该制剂的质量，本文建立了清瘟解毒片中芍药苷含量测定的反相高效液相色谱法，该法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。
1 仪器与试药
agilent 1100高效液相色谱仪(安捷伦公司)，agilent 1100系列双元泵，agilent 1100可变波长检测器，agilent 1100/化学工作站。dl360超声波清洗器(宁波石浦海天电子仪器厂)，工作频率(4.5±0.05)khz，输出功率240 w。
芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736200526)，清瘟解毒片(中山市中智制药有限公司，批号：20060921、20060922、20060923，规格：0.6 g/片)，甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，水为双蒸水。
2 实验部分
2.1 样品液制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品19.8 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液 (芍药苷质量浓度为99 μg·ml-1)。
2.1.2 供试品溶液的制备 取清瘟解毒片样品，研细，取约0.25 g，精密称定，精密加水25 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.1.3 阴性对照液的制备 取处方组成中除赤芍外的其余成分制成不含赤芍的阴性对照品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。 2.2 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱为 diamonsilc18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司)，甲醇kh2po4(体积比30∶70)，流速为1.0 ml·min-1，检测波长230 nm，柱温为室温。分别取对照品溶液(芍药苷质量浓度为29.7 μg·ml-1)、供试品溶液和阴性对照溶液10 μl注入色谱仪，理论板数以芍药苷峰计算应不低于4 500;芍药苷的拖尾因子为0.94，保留时间约为21.8 min，芍药苷与其他组分可基线分离;阴性样品不干扰样品测定(图1)。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线制备 分别吸取一定量的芍药苷对照品贮备液，加甲醇稀释成芍药苷质量浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4 μg·ml-1的溶液。依次进样10 μl，每个浓度测定3次以上。以峰面积(a)对对照品溶液质量浓度(ρ)进行回归，得芍药苷回归方程a=11.20ρ-1.48，r=0.999 7。表明芍药苷质量浓度在4.95～59.4 μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.2 精密度试验 取质量浓度为29.7 μg·ml-1的芍药苷对照品溶液10 μl连续测定5次，其峰面积的平均值为326.6，rsd为0.89%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 取供试品溶液(20060922)在0、2、4、6、8 h 分别进样10 μl，记录峰面积，结果芍药苷峰面积的平均值为334.6，rsd为1.64%，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.3.4 重复性试验 取同一批号(20060922)样品6份，照“2.1.2”方法提取、测定，结果芍药苷平均含量为2.86 mg·g-1，rsd为0.90%。表明分析方法精密度良好。
2.3.5 加样回收试验 精密称取同一批号样品(20060922)共6份，加入相应量的芍药苷对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果芍药苷平均回收率为104.1%，rsd=0.40%，表明本方法准确可靠，见表1。广东药学院学报 第25卷 第4期 易润青，等.hplc法测定清瘟解毒片中芍药苷的含量表1 回收率试验结果
2.4 样品测定
取清瘟解毒片样品3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液(29.7 μg·ml-1)与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量，结果见表2。表2 样品测定结果
3 讨 论
3.1 根据芍药苷的溶解性[3],分别以体积分数50%甲醇[4]、水[5]、体积分数50%乙醇[6]为提取溶剂进行试验，测得芍药苷含量从高到低依次为水、体积分数50%乙醇、体积分数50%甲醇，以水为溶剂含量最高，且达到基线分离，因此以水为提取溶剂。考察了超声提取20、30、40 min对提取率的影响，结果表明，超声提取30 min含量达最高，时间增加，含量反而降低。因为时间过长，芍药苷受热破坏[7]。因此选择超声提取30 min。
3.2 hplc法测定中药中芍药苷的报道极多，但由于处方各异，所选流动相种类较多。本实验中流动相曾选用乙腈0.1%磷酸溶液[8]、甲醇水，但杂质峰过多，达不到基线分离。经反复实验探索，采用甲醇0.05 mol/l kh2po4(体积比30∶70)为流动相后，方得满意结果。
【参考文献】 [1] ybz13212006. 国家食品药品监督管理局标准(试行)[s]. [2] 霍艳铃，姜鸿，张曦弘. hplc法测定清瘟解毒片中葛根含量的研究[j]. 中医药学刊，2004，22(4)：752-753. [3] 陈发奎. 常用中草药有效成分含量测定[m]. 北京：人民卫生出版社，1997:130. [4] 林生文，李玮玲，朱炳辉. 仲景胃灵片中芍药苷的含量测定[j]. 分析测试学报，2004，23(1):114-116. [5] 周淑芳，唐声武，郭力，等. 肛肠命颗粒质量标准的研究[j]. 中草药，1999，30(8)：579. [6] 毋福海，易军，宋粉云，等. 四物片中芍药苷的hplc测定[j]. 中国医药工业杂志，2004，35(4)：236-237. [7] 黄夏敏，彭中芳. 白芍在中成药生产过程中芍药苷含量变化的研究[j]. 中药新药与临床药理，1998，9(4)：236-237. [8 ] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2005年版一部[m]. 北京：化学工业出版社，2005：68-69.