内容
作者：李正言，翟延君，滕 宇，伍伟超
【摘要】 目的测定柘木药材中双指标成分槲皮素与山萘酚的含量，为柘木商品药材的质量控制提供方法。方法采用高效液相色谱法，以槲皮素和山萘酚为指标，对购自广西不同商品柘木药材进行含量测定。结果不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量有显著差异。结论实验方法简便、快速、准确，可为鉴定柘木的药用部位和控制柘木药材的质量提供参考。
【关键词】 柘木; 槲皮素; 山柰酚; 高效液相色谱法
柘木为桑科植物柘树cudrania tricuspidata(carr.)bur.的干燥根及木材[1]。柘木始载于《本草拾遗》，1977年版《中国药典》曾将柘树的根收载于穿破石项下[2]，是我国传统的中药材。柘树广泛分布于我国的华南、华东、西南以及河北以南地区。民间多用柘木的水煎液治疗消化系统的癌症[3]，能明显改善病人生活质量，延长生存期。柘木糖浆作为消化系统癌症治疗中的辅助治疗药物具有较好的临床疗效。文献报道柘木中含有黄酮、生物碱及多糖等多种成分，现代药理研究证明黄酮类成分具有体外抗肿瘤的作用[4]。www.11665.COm本实验采用hplc法，以槲皮素和山萘酚为指标，对购自广西不同商品的柘木药材进行了含量测定，通过双指标成分含量来评价柘木商品药材的质量和鉴定药用部位，为柘木商品药材的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 agilent 1100液相色谱仪;dad检测器;电子天平(上海天平仪器厂);kq-250型超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。
1.2 试药实验所用药材购于广西各地，经广西中医学院中药鉴定教研室廖月葵老师鉴定为桑科柘属植物柘树cudrania tricuspidata(carr.)bur.的干燥根及木材。槲皮素(批号: 10129905)、山萘酚(批号:1108612200303)购自中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯(天津科密欧公司);水为亚沸纯化水、磷酸、盐酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为dikma diamonsil-c18，(5 μm，200 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水(48∶52);检测波长365 nm;体积流量: 1 ml·min-1。理论塔板数按槲皮素和山萘酚峰计均大于5 000。见图1。
a. 对照品 b. 供试品 1-槲皮素 2-山萘酚
图1 高效液相色谱图
2.2 供试品溶液的制备 精密称取柘木药材粉末(过60目筛)2 g，置于50 ml圆底烧瓶中，加甲醇25 ml，称重，回流提取2 h，冷却，补足失重，过滤，精密移取续滤液10 ml，加入25%的盐酸10 ml，水浴回流水解30 min，快速冷却，转移至25 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取样，过滤，作为供试品溶液。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品5.10 mg、山萘酚对照品5.05 mg, 各加甲醇溶解定容至25 ml，作为贮存溶液。各取5 ml按1∶1混合后，定容至25 ml容量瓶中，配成混合对照品溶液，浓度分别为40.8 μg·ml-1和40.4 μg·ml-1。
2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液(槲皮素和山萘酚)1，2，3，4，5，6 μl注入高效液相色谱仪中，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标进行回归，得标准曲线回归方程。槲皮素： y=165.12x-33.991，r=0.999 9，线性范围：0.040 8～0.245 μg;山萘酚: y = 168.47x-45.532, r= 0.999 6，线性范围：0.040 4～0.242 μg。
2.5 精密度实验取含槲皮素和山萘酚的混合对照品溶液，进样5 μl，按上述色谱条件，连续进样5次，记录槲皮素、山萘酚的峰面积，计算rsd分别为0.89%与0.92% (n=5)，表明精密度良好。
2.6 稳定性实验取柘木供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10 h 测定，结果槲皮素峰面积的rsd为1.47%，山柰酚峰面积的rsd为1.15%。表明溶液中槲皮素和山萘酚在10 h内稳定性良好。
2.7 重复性考察 取样品5份，按供试品方法制备。分别精密吸取20 μl，根据槲皮素、山萘酚色谱峰面积测定含量，计算rsd分别为1.18%与1.31%(n=5)。
2.8 回收率实验精密称取已知准确含量的样品4.0 g，置圆底烧瓶中，精密加入槲皮素对照品0.660 mg、山萘酚对照品1.233 mg，按供试品的方法制备。精密吸取20 μl，根据色谱峰面积测定含量。结果表明，本方法回收率均在95%～105%之间，rsd分别为1.41%与1.63%，符合有关规定。
2.9 样品测定按上述“2.2”项方法制备供试品溶液，测定不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量。结果见表1。表1 不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量
药用部位1广西省南宁市郊区0.090.20根2广西省南宁市江西村0.090.22根3广西省南宁市尹岭岩0.100.21根4广西省扶绥县国医药店0.090.43根5广西省南宁市九塘21号店面0.110.20根6广西省南宁市大明山0.100.21根7广西省邕宁九塘1号店面0.090.31根8广西省南宁市武鸣县0.140.30根9广西省金秀县0.060.23根10广西省灵山县0.030.28根11广西省南宁市九塘4号店面0.220.06茎12广西省南宁市郊吴圩0.200.08茎13广西省窑阳县0.290.05茎14广西省上林县0.210.35茎及根15广西省邕宁九塘2号店面 0.030.05品种质量有问题
3 讨论
本实验之前比较了采自同一产地柘木不同药用部位槲皮素与山萘酚的含量，结果发现根的山萘酚含量均≥0.2 mg·g-1，而槲皮素的含量均较低;茎的槲皮素含量均≥0.2 mg·g-1，而山萘酚含量均较低。根据这一结论可以看出，本实验15个样品中，1～10号样品由于山萘酚的含量均≥0.2 mg·g-1，且槲皮素的含量较低，此商品药材鉴定为柘木的根;11～13号样品由于槲皮素的含量均≥0.2 mg·g-1，山萘酚的含量较低，由此鉴定该商品药材为柘木的茎。14号样品由于槲皮素和山萘酚的含量均≥0.2 mg·g-1，该商品药材为柘木的根及茎混合品。15号商品药材槲皮素与山萘酚的含量均很低，因此判定该样品的品种质量有问题。
据文献报道柘木中黄酮类化合物槲皮素与山萘酚大多以糖苷的形式存在，实验中发现，未水解的样品槲皮素和山萘酚的含量很低，水解后含量显著升高，因此本实验采取酸水解方法进行前处理，对于酸水解条件的选择，考察了盐酸的不同浓度、加酸量、水解时间和不同提取方法。结果发现，随着酸浓度的增加，槲皮素与山萘酚的含量也增加，在盐酸浓度大于25%后含量增加并不明显且考虑到酸浓度太高对色谱柱的损害，因此选用25%的盐酸10 ml，加热回流30 min。
流动相的ph值对色谱峰的峰形及分离度影响很大，色谱条件最终确定流动相为：甲醇-0.1%磷酸水(48∶52)，色谱峰分离度良好。本实验的方法简便，可靠，可用于分析鉴定柘木的不同药用部位，评价柘木商品药材的品种与质量，为柘木商品药材的鉴定与质量控制提供参考。
【参考文献】 [1] 江苏新医学院.中药大辞典(下册)[m].上海：上海科学技术出版社，1998：1502. [2] 国家药典委员会.中国药典，ⅰ部[s].北京：人民卫生出版社，1977：443. [3] 丁红华，陈拣珲，朱莉菲，等.柘木糖浆治疗胃癌疗效观察[j].中成药，2001，23(2)：151. [4] 张英慧，徐誉泰.柘木根黄酮注射液对小鼠s180肿瘤的抑制作用[j].佛山科学技术学院学报，2001，19(3)：75. [5] 张元桐，翟延君，康廷国，等.hplc测定不同地区水红花子中花旗松素含量[j].中国中药杂志，2007，32(20)：2190.