补中益气丸中黄芪甲苷的含量高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定
内容
【摘要】 目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(hplc-elsd)法测定补中益气丸的黄芪甲苷含量。方法色谱柱为 nova-pak c18 柱，柱温为25℃，流动相为乙腈-水(40∶60)，流速为1 ml/min，elsd条件为漂移管温度100℃， 载气流速 1.6 l/min。结果黄芪甲苷进样量在 2.094～39.924 mg范围内与峰面积线性关系良好，(r=0.999 9)，平均加样回收率为98.26%，rsd为1.04%(n=6)。结论所用方法简便快捷，测定结果可靠，可用于补中益气丸的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱-蒸发光散射法; 补中益气丸; 黄芪甲苷
补中益气丸由黄芪、党参、甘草等10味药材组成，具有补中益气、升阳举陷的功效。君药为黄芪，2005年版《中国药典》ⅰ部收载补中益气丸(水丸)含量测定方法，本文参照药典标准，以黄芪甲苷为主要成分，用高效液相色谱-蒸发光散射(hplc-elsd)法测定制剂中黄芪的含量，以更好地控制该药品质量，建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定补中益气丸中黄芪甲苷含量方法。
1 仪器与试药
岛津 2010ht液相色谱仪(日本岛津公司);pl-2100 elsd 检测器。黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所 (批号为 110781-20051，含量测定用 );样 品(不同厂家提供 );乙腈(色谱纯)，纯水，其他试剂(色谱纯)。WWW.11665.COm
2 方法与结果
2.1 色谱条件与 esld条件色谱柱为nova-pak c18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);柱温25℃ ;流动相为乙腈-水(40∶60);流速1 ml/min。elsd条件为漂移管温度100℃，气体流速 1.6 l/min。
2.2 溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品12.5 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成 0.5 mg/ml对照品贮备液。取本品适量，研碎，取约5 g，精密称定 ，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取 5 h，提取液回收甲醇至干，残渣加水 25 ml，微热使溶解，用乙醚轻摇洗涤 2次 ，20 ml/次，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取 5次，20 ml/次。合并正丁醇液，用氨试液洗涤 3次，40 ml/次。正丁醇液回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。 2.3 方法学考察
2.3.1 专属性实验取空白对照品溶液(缺黄芪)、对照品溶液、供试品溶液，依法测定。结果表明，空白对照品溶液色谱在与对照品色谱峰相应的保留时间处无色谱峰，表明空白无干扰 ，方法可行，见图1。
2.3.2 线性关系考察精密吸取对照品贮备液(0.498 8 mg/ml)5.0，10.0，20.0，40.0，80.0 μl，按“2.1”项下色谱条件进样 ，记 录色谱图，测定 其峰面积。以进样量的常用对数(c) 对其相应峰面积常用对数(a)进行回 归分析 ，得回归方程a=1.494 4c+ 10.461，r=0.999 9(n=5)。结果表明， 黄芪甲苷进样量在25.00～40.00μl(0.498 8 mg/ml)范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.3 稳定性实验取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，6，8，12 h 依法测定 。结果黄芪甲苷峰面积的rsd小于 2.0% ( n=6)，表 明供试品 溶液在 12 h内稳定性良好。
2.3.4 精密度实验吸取对照品贮备液 (0.498 8 mg/ml)，依法连续进样 5次。结果峰面积分别为 1 101 925，1 078 561， 1 079 648，1 116 161，1 103 303，rsd=1.5% (n=5)。
2.3.5 重复性实验取同一批号样品，按“2.2”项下方法制备 5份供试品溶液，分别进样，测定黄芪甲苷的峰面积，计算黄芪甲苷含量。结果黄芪甲苷含量分别为0.581 0，0.577 6，0.583 1，0.581 3，0.581 4 mg/g，rsd为 0.3%(n=5)。
2.3.6 加样回收实验取本品约2.5 g，共 6份，精密称定，分别加入黄芪甲苷对照品溶液(0.498 8 mg/ml)3 ml，按“2.2”项下方法制备供试品溶液并计算回收率。结果见表 1。
2.4 样品含量测定采用“2.2”项下方法，对不同批号、不同厂家的 6批样品进行处理，按“2.1”项下色谱条件测定。结果6批样品的黄芪甲苷含量分别为 0.216 5，0.305 1，0.116 7，0.580 9，0.279 6，0.307 2 mg/g。 表1 黄芪甲苷加样回收实验结果
3 讨论
蒸发光散射监测器是一种通用型质量检测器，适用于无紫外吸收的化合物检测。本实验采用 hplc-elsd法测定复方制剂补中益气丸中黄芪甲苷的含量，参考《中国药典》色谱条件下目标化合物能达到良好的分离，结果可靠，重复性好，适用于补中益气丸的质量评价。
【参考文献】 [1] 国家药典委员会 .中国药典，ⅰ部[s].北京：化学工业出版社，2005：480.
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