内容
【摘要】 目的 建立五黄膏中没食子酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 ml/min;检测波长为270 nm。结果 没食子酸的线性范围为0.189 2～1.892 μg(r=0.999 9),平均回收率为99.2%,rsd=1.22%。结论 本法高效、快速、灵敏,可作为五黄膏质量控制的有效方法。
【关键词】 五黄膏;没食子酸;高效液相色谱法;含量测定
abstract：objective to set up a method for determining the content of gallic acid in wuhuang gao. methods hplc separation was performed by gradient eluting with methanol-0.1% phosphoric acid at the flow rate of 1.0ml/min. the detection wavelength was 270 nm. results the linear range of gallic acid was 0.189 2～1.892 μg, r=0.999 9. the average recovery rate was 99.2%, rsd=1.22%. conclusion the method is highly effective, quick and sensitive, and suitable for quality control of wuhuang ointments.
key words：wuhuang ointments;gallic acid;hplc;content determination
五黄膏是由五倍子、黄芩、冰片3味中药组成的复方制剂,具有清热解毒、消肿止痛、化瘀散结、除湿收敛之功效[1],临床上用于治疗麦粒肿及疖、甲沟炎。WwW.11665.cOM五倍子为方中主药,没食子酸为其主要有效成分。为有效控制产品质量,笔者建立了五黄膏中没食子酸含量的高效液相色谱(hplc)测定法。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪,二元梯度泵,spd-m20a检测器, sil-20ac自动进样器,cto-20a柱温箱,lc-solution化学工作站。
没食子酸对照品(批号110831-200302,纯度为99.1%)由中国药品生物制品检定所提供;五黄膏(批号060832、060833、060834、060835、060836、060837)由北京双吉制药有限公司提供。甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
shiseido capcell pak c18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇为流动相a,以0.1%磷酸溶液为流动相b,按表1中的规定进行梯度洗脱。检测波长为270 nm,流速1.0 ml/min,进样量10 ?l。表1 梯度洗脱表
2.2 空白试验
按处方中药味比例,配制不含五倍子的群药,按其工艺制成空白制剂(由北京双吉制药有限公司提供),再按供试品溶液的制备方法制备并测定,色谱图见图1。表明阴性样品溶液在与没食子酸对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为无干扰。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品适量,加50%甲醇制成每1 ml含60 ?g的溶液,作为对照品溶液。 2.4 供试品溶液的制备
取本品0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50 ml,密塞,摇匀,称定重量,加热回流1 h,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 ?m)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
2.5 线性关系的考察
精密吸取没食子酸对照品溶液(0.094 6 mg/ml)2、4、8、12、16、20 ?l,注入液相色谱仪,记录峰面积。以峰面积值(a)对进样量(c)进行回归,得标准曲线方程为：a=3.877×106+2.468×103,r=0.999 9(n=6)。没食子酸在0.189 2～1.892 ?g
范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10 ?l,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。重复测定6次,没食子酸峰面积rsd=0.25%。
2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号060832)10 ?l,分别于配制后0、4、8、12、24 h测定,测得峰面积rsd=0.27%,表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.8 重复性试验
取同一批样品(批号060832)6份,分别按样品测定法测定,求得rsd=0.94%,结果表明方法重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批样品(批号060832,6.317 mg/g) 0.25 g,分别精密加入没食子酸对照品溶液(0.060 72 mg/ml) 25 ml,再精密加入50%甲醇25 ml,按上述供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定,计算回收率。结果见表2。
2.10 样品的测定
在批号为060833、060834、060835、060836、060837的5批样品中没食子酸含量分别为6.6、6.6、5.3、6.4、6.4 mg/g。 表2 加样回收率试验结果
3 讨论
因为五黄膏中的五倍子为原粉入药,直接发挥药效,所以供试品溶液提取方法未选择测定水解后的没食子酸,而选择直接提取进行测定。又因是软膏剂,基质较多,影响色谱峰的重现性,故选择了梯度洗脱的方法。
供试品溶液的提取方法,考察了甲醇和50%甲醇为溶剂,超声和回流提取30、60、90 min,结果表明,采用50%甲醇为溶剂,回流提取60 min的方法,提取较为完全。
【参考文献】 [1] 国家药典委员会.国家药品标准——新药转正标准(第10册)[s].北京：人民卫生出版社,1997.40.