内容
【摘要】 目的本研究探讨岩藻糖转移酶9（fucosyltransferase9,fut9）在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学sp法检测11例良性乳腺增生组织和114例乳腺癌组织（其中47例合并转移淋巴结，67例无转移淋巴结）中fut9的表达。结果fut9在良性乳腺增生组织中的阳性表达率为9.1%（1/11），而在乳腺癌组织中的阳性表达率为71.9%(82/114),在转移的淋巴灶中阳性表达率为100%（47/47）。乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于良性乳腺增生组织的阳性表达率，两组比较差异有统计学意义（p 0.01）。乳腺癌组织中有淋巴结转移组的阳性表达率为80.9%（38/47），明显高于无淋巴结转移组的阳性表达率65.7%（44/67），两组比较差异有统计学意义（p 0.05）。在有淋巴结转移组fut9的表达与tnm分期以及转移的淋巴结个数相关（p 0.05）。fut9的表达与er、pr、her2的表达无相关性（p 0.05）。结论fut9在乳腺癌组织中的表达明显增高；fut9的表达与淋巴结转移、转移的淋巴结个数以及tnm分期有关；fut9可能与乳腺癌淋巴道转移有关。 【关键词】 乳腺癌;岩藻糖转移酶9;淋巴道转移 expression of fucosyltransferase 9 and its clinical significance in human breast carcinoma ji li, wang hui, wei juncheng, ye shuangmei, zhou li, lu yunping, ma ding department of obstetrics and gynecology, tongji hospital, tongji medical college, huazhong university of science and technology, wuhan 430030，china corresponding author: ma ding, e-mail：dma@tjh.tjmu.edu.cnabstract：objective this study was to investigate the expression of the fucosyltransferase9 and its clinical significance in human breast carcinoma.methodsfut9 expression was detected using immunohistochemistry sp method in 11 breast hyperplasia specimens and 114 breast cancer specimens (47 with lymphatic metastasis and 67 without metastasis).resultsthe positive rate of fut9 in breast hyperplasia, breast cancer and metastatic lymph node were 9.1%（1/11）,71.9%( 82/114) and 100%（47/47）,respectively. the expression of fut9 in breast cancer specimens was significantly higher than breast hyperplasia tissues (p 0.01). breast cancer patients with lymphatic metastasis had higher fut9 expression rate of 80.9%（38/47）than patients without none lymphatic metastasis 65.7%(44/67). the differences between two groups have statistical significance (p 0.05). we also have found that the expression of fut9 was positively correlated with tnm staging and the numbers of metastatic lymph nodes in patients (p 0.05）,however the er status, the pr status and the her2 status were not associated with fut9 expression (p 0.05）. conclusionexpression of fut9 in breast cancer was positively correlated with malignant progression of disease. our results strongly suggested that fut9 may be involved in the process of breast's lymphatic metastasis. key words：breast neoplasm; fucosyltransferase9; lymphatic metastasis 1资料与方法 1.1标本来源收集武汉市同济医院2006年1月～2007年6月期间114例乳腺癌行根治术切除的标本，其中合并淋巴结转移者47例，无淋巴结转移者67例。WwW.11665.Com患者均为女性；年龄为26～82岁，中位年龄46岁；术后病理均确诊为乳腺浸润性导管癌；所有患者术前均未行放、化疗及激素治疗。同时选取11例良性乳腺增生组织作对照。组织标本经10％的福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。 1.2主要试剂兔抗人岩藻糖转移酶9（catalog no.ba 2382）购自boster公司，免疫组织化学链霉素标记的抗兔二抗和辣根酶标记链霉卵白素工作液购自北京中杉金桥生物技术有限公司，显色试剂盒（dab－kit）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.3方法严格按免疫组织化学（supervision）法试剂盒说明书操作。主要步骤：石蜡切片，常规脱蜡脱水，枸橼酸盐抗原修复15min，3%h2o2浸泡10min,3%正常羊血清孵育20min,一抗4℃ 过夜，生物素化标记的二抗37℃ 15min,辣根酶标记链霉卵白素37℃ 15min，dab显色，苏木精复染，脱水封片。以0.01mol/l pbs液代替一抗作为阴性对照。 1.4阳性结果判断结果判定采用九分制[4]：每个标本均在olympus显微镜10×20倍下选取fut9阳性癌细胞最密集区，随机观察10个视野，在每个视野中计数肿瘤细胞中的阳性细胞百分率，然后取其平均值，并计分，其标准为：阳性细胞率≤10％为0分， 25％ 为1分，25%～50％ 为2分， 50％为3分；按染色程度：0分为不显色或显色不清，1分为淡黄色，2分为中度黄色，3分为棕黄色。根据“阳性细胞得分×染色程度得分”计算总分。总分＜3分为阴性，3分≤总分＜6分为阳性（+），总分≥6分为强阳性（++）。 1.5统计学方法各组数据间的比较采用χ2检验，相关分析采用spearman’s法。所有统计资料均采用spss15.0软件进行分析。以α＝0.05作为差异有显著性的标准。 2结果 2.1fut9在良性乳腺增生、乳腺癌组织以及转移的淋巴结中的表达fut9主要在乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶的细胞膜着色，细胞浆中少量着色，呈棕黄色颗粒，均一弥散分布，见图1。fut9在乳腺癌原发灶中阳性表达率为71.9%(82/114)，在淋巴结转移灶组织中阳性表达率为100%（47/47）明显高于良性乳腺增生（9.1%，1/11），差异有统计学意义（χ2=17.810，p＜0.01）。fut9在乳腺癌中有淋巴结转移组阳性表达率为80.9%（38/47），明显高于无淋巴结转移组（65.7%，44/67），差异有统计学意义（χ2=9.071，p＜0.05），见表1。 a: the primary tumor（×200）;b: the metastatic lymph node （×200） 2.2fut9的表达与乳腺癌临床病理的关系在选取的乳腺癌标本中雌激素受体er阳性者88例，阴性者18例；孕激素受体pr阳性者60例，阴性者45例；her2阳性者71例，阴性者34例。而在乳腺癌组织中fut9的表达与er、pr、her2的表达无相关性，r值分别为-0.028、-0.165、-0.024（p 0.05）。在转移的乳腺癌组织中，fut9的表达与er、pr、her2的表达无相关性，r值分别为0.003、-0.104、-0.003（p 0.05）；fut9与tnm分期（r=0.401、p 0.05）以及转移的淋巴结个数（r=0.370，p 0.05）的表达成正相关。 3讨论 以往对岩藻糖转移酶基因各亚型的研究，主要集中在fut3、fut4、fut5、fut6、fut7，尤其是fut7，有研究表明其可以通过合成唾液酸化的lewis x（sialyl lewis x,slex）影响乳腺癌的转移和预后 [5]。fut9作为岩藻糖转移酶家族新的成员，有关它的研究主要集中在脑和神经系统，而对肿瘤侵袭和转移影响的研究很少。 fut9定位在染色体6q16[6]，在胚胎形成两个月就有很强的表达[7],它是一种跨膜蛋白，由359个氨基酸组成，其mrna长12815bp。shoko n等[8]的研究表明，fut9在大脑和小脑的细胞膜上表1fut9在乳腺增生和乳腺癌组织中的表达高表达，推测其可能是脑中合成lewis x最重要的酶。 本研究发现fut9在乳腺癌组织比乳腺增生组织中高表达，且有转移组比无转移组强，转移的淋巴灶组比无转移组强，两两间的差异有统计学意义（p 0.05）。而且在乳腺癌合并淋巴结转移组，fut9的表达与乳腺癌的tnm分期，淋巴结的转移个数呈正相关（p 0.05），提示fut9的表达可能与乳腺癌的侵袭转移有密切关系。越来越多的研究表明，在乳腺癌的侵袭和转移中，淋巴道转移为其主要转移方式，且发生较早，研究乳腺癌淋巴道转移的分子机制成为近年来的研究热点。刘刚等[9]研究表明50%以上的乳腺癌有淋巴道转移，淋巴道转移在乳腺癌的侵袭转移中起重要作用。shoko n等[8]研究证实fut9决定了lewis x的表达，其可能优先岩藻糖基化多克隆乳糖链的远端glcnac[10]，从而合成lewis x糖原表位，lewis x抗原可能与内皮细胞表面的清道夫受体c型凝集素（the scavenger receptor ctype lectin,srcl）结合，导致溶细胞作用[11]，从而促进乳腺癌的淋巴转移。本研究尚未发现在乳腺癌组织（包括有淋巴结转移者）中fut9的表达与er、pr、her2的表达相关（p 0.05）。这表明fut9可能不参与激素调控的乳腺癌发生发展过程。综上所述，fut9的表达与乳腺癌的淋巴道转移存在密切关系，阻断其表达可能成为临床治疗的靶点。 【参考文献】 ［1］mika k,takashi k,hiroko i,et al.α1,3fucoslytransferase ix (fuctix) is very highly conserved between human and mouse; molecular cloning,characterization and tissue distribution of human fuctix[j].febs letters,1999,452(3):237242. ［2］yutaro a,yoshikazu k,hirotaka s,et al.increased expression of lewis x and y antigens on the cell surface and fut 4 mrna during granzyme binduced jurkat cell apoptosis[j]．biol pharm bull,2007,30(4):655660. ［3］valentina b,andrea h,birgit k,et al.ceacam1,an adhesion molecule of human granulocytes,is fucosylated by fucosyltransferase ix and interacts with dcsign of dendritic cells via lewis x residues[j]．glycobiology,2006,16(3):197209. ［4］miyazaki t,kato h,fukuchi m,et al.epha2 overexpression correlations with poor prognosis in esophageal squamous cell carcinoma[j].int j cancer,2003,103(5):657663. ［5］丁克峰,郑树.岩藻糖转移酶基因亚型与乳腺癌转移和预后的关系[j].中华外科杂志,2004,42(9):546550. ［6］kaneko m,kudo t,iwasaki h,et al.assignment of the human alpha 1,3fucosyltransferase ix gene (fut9) to chromosome band 6q16 by in situ hybridization[j].cytogenet cell genet,1999,86(34):329330. ［7］anne c t,philippe c,jeanjacques c,et al.fut4 and fut9 genes are expressed early in human embryogenesis [j].glycobiology,2000,10(8):789802. ［8］shoko n,hiroko i,kazuyuki n,et al.a1,3fucosyltransferase ix (fut9) determines lewis x expression in brain[j].glycobiology,2003,13(6):445455. ［9］刘刚,沈镇宙,邵志敏.肿瘤新生淋巴管调控机制与淋巴道转移研究进展[j].临床肿瘤学杂志,2003,8(3):226228. ［10］shoko n,hiroko i,mika k,et al.α1,3fucosyltransferase 9 (fut9; fuctix) preferentially fucosylates the distal glcnac residue of polylactosamine chain while the other fourα1,3fut members preferentially fucosylate the inner glcnac residue [j].febs letters,1999,462(3):289294.