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祖师麻超滤纯化工艺研究
内容
作者：魏舒畅，武晓玉，金 辉，张广清，陈耀武 作者单位：甘肃中医学院，甘肃兰州
【摘要】 目的 考察超滤技术纯化祖师麻乙醇提取液的可行性。方法 采用不同分子截流量的超滤膜滤过祖师麻乙醇提取液，考察祖师麻甲素保留率、除杂力度、滤液稳定性及相关工艺参数。结果 用超滤技术纯化祖师麻乙醇提取液，祖师麻甲素保留率可达96 %以上，滤液澄明度好，除杂力度较大。结论 该工艺可用于纯化祖师麻的工业化生产。
【关键词】 祖师麻；纯化；超滤
祖师麻系瑞香科植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)、陕西瑞香(Daphne tangutica Maxim.)或凹叶瑞香(Daphne retusa Hemsi.)的干燥茎皮及根皮，其主要成分为祖师麻甲素、祖师麻乙素等[1]，民间广泛用于治疗疼痛、跌打损伤、风湿性关节炎和支气管炎等病症。药理和临床实验证明祖师麻甲素具有消炎、镇痛、镇静等作用，以祖师麻为原料药生产的外用膏剂、片剂、注射剂已用于临床[2]。由于提取祖师麻的溶剂为高浓度乙醇，传统的水提醇沉无法用于祖师麻醇提取液的进一步纯化，因此我们考虑利用超滤技术除去祖师麻醇提取液中的大分子杂质，提高祖师麻提取物的纯度，从而提高以之为原料的各种剂型的制剂质量和稳定性。
1材料与仪器
1.1材料
祖师麻（购于兰州黄河药市，经兰州大学医学部赵汝能教授鉴定为黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche.)的干燥茎皮及根皮），祖师麻甲素标准品（中国药品生物制品检定所，批号：200405），甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
1.2主要仪器
中空纤维超滤装置（天津膜天膜工程技术有限公司），空纤维超滤膜(海宁丰源过滤设备有限公司）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；艾柯—实验室超纯水系统（成都唐氏康宁科技有限公司）；真空抽滤泵（郑州杜甫仪器厂）；真空干燥箱（上海益恒实验仪器有限公司）；Agileng1100高效液相色谱仪（Agileng1100化学工作站，Agileng1100二元泵，Agileng1100恒温箱，Agileng1100DAD检测器，安捷伦科技有限公司）；DD 5M低速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。
2实验方法及结果
2.1 样品的制备
2.1.1 药材提取
由预实验可知祖师麻对溶剂的吸收量为药材的2倍。称取祖师麻粗粉6.4 kg分为两组，用6倍量65 %乙醇冷浸提取，每组提取3次，每次24 h。收集第1组药材第1次提取液保存；第1组药材第2次提取所收集的提取液用于第2组药材的第1次提取，第1组药材第3次提取所收集的提取液用于第2组药材的第2次提取，用新配制的6倍量65 %乙醇进行第2组药材的第3次提取，收集提取液。将所有提取液混匀，低速离心机4 000 r/min离心10 min，得上清液64 L。
2.1.2未超滤样浸膏的制备
取上清液2 L浓缩至稠膏，50 ℃真空干燥，得未超滤样浸膏49.4 g，保存备用。
2.2 超滤样品制备[3]
2.2.1 通量变化的考察
取上清液4份，每份5 L，以分子截流量6 000的超滤膜过滤，在较高滤过压力条件下过滤，考察通量随截流液压力的变化，结果见表1。
2.2.2 超滤膜分子截流量的选择
取上清液2份，每份10 L，分别以截流量为6 000和30 000的超滤膜在0.135 MPa压力下过滤，得6 000膜超滤液和30 000膜超滤液。分别取两者超滤液的20 %保存备用。其余超滤液分别真空干燥，得6 000膜超滤样浸膏和30 000膜超滤样浸膏。表1 压强通量变化表
2.3祖师麻甲素的含量测定[4]
2.3.1 色谱条件
色谱柱BDS（250 mm×4.6 mm）；流动相为甲醇∶0.5 %乙酸（30∶70）；检测波长327 nm；柱温25 ℃；流速1 mL/min。
2.3.2 对照品溶液的制备
精密称取祖师麻甲素标准品2.5 mg,置10 mL容量瓶中，加95 %乙醇7 mL，溶解后加水至刻度线定容，摇匀，即得。
2.3.3 供试品溶液的制备
精密称取未超滤样浸膏、6 000膜超滤样浸膏、30 000膜超滤样浸膏各0.5 g，分别用65 %乙醇溶解并定容到100 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.4 工作曲线制备
精密吸取对照品溶液2.5，5，10，15，20 μL进样，测定，以进样量为横坐标(X)，对照品峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，用SPSS12.0统计软件进行回归计算。得回归方程为：Y=3.331×10-7X+1.473×10-4(r=0.9995)。
2.3.5 样品测定
分别精密吸取供试品溶液20 μL，按上述色谱条件测定，将测定结果代入回归方程计算祖师麻甲素测得量，同时考察不同分子截流量膜对祖师麻甲素保留情况及除杂力度，结果见表2。表2 祖师麻甲素保留情况及除杂力度
根据上清液样品和超滤样品的出膏率计算超滤除杂力度，除杂力度（除杂率）=（上清液出膏率-超滤样出膏率）/上清液出膏率×100 %
2.4 不同祖师麻样品的物理性质比较
2.4.1 澄明度考察
取上清液、6 000膜超滤液、30 000膜超滤液各150 mL封装于输液瓶中，于40 ℃曝光保存3月，观察各样品的澄明度，结果见表3。
2.4.2 复溶性考察
取未超滤样浸膏、6 000膜超滤样浸膏、30 000膜超滤样浸膏各1 g,加65 %乙醇40 mL在室温下重新溶解，考察3种样品的复溶性，结果见表3。
表3不同祖师麻样品性状比较
样 品 种 类液体澄明度复溶性 CRH（%) 未超滤样絮状不溶物较多 溶解速度较慢、部分不溶436 000膜超滤样 澄明液体 溶解速度较快、全部溶解 5730 000膜超滤样有少量絮状不溶物溶解速度较快、部分不溶 55
2.4.3 吸潮性考察
取未超滤样浸膏、6 000膜超滤样浸膏、30 000膜超滤样浸膏各1 g,装入开口的容器，置恒温恒湿箱中，在25 ℃下测定其临界相对湿度（CRH）。比较3种祖师麻浸膏样品的吸潮性大小，结果见表3。
3 讨论
可能由于超滤除掉了鞣质等化学性质不稳定的大分子物质，6 000膜超滤液与30 000膜超滤液经曝光保存3月澄明度良好；并且6 000膜超滤样与30 000膜超滤样的吸潮性明显小于未超滤样，6 000膜超滤样与30 000膜超滤样的吸潮性相差不大；但在祖师麻甲素保留率相当的情况下，6 000膜超滤样比30 000膜超滤样有较大的除杂力度。所以6 000膜的综合效果比30 000膜更好。
由于复杂的中药成分对超滤膜污染造成滤过通量的迅速下降，因此膜污染问题是制约超滤在中药工业化生产中的一个主要因素。在该工艺研究中我们采用表面活性剂对超滤膜进行了动态修饰，防止了水溶性大分子成分在膜上的吸附，较好地解决了这一问题。
综合实验结果来看，采用分子截流量为6 000的中空纤维超滤膜纯化祖师麻乙醇提液的工艺,具有工艺参数可行、有效成分保留率高、提取液稳定性好和膜污染程度较小、工艺成本低的特点，提示该工艺可适用于祖师麻的工业化纯化过程。
【参考文献】
[1]李书慧,吴立军,殷红英.祖师麻化学和药理活性研究进展[J].中国中药杂志,2002,27(6):402-403.
[2]张薇,柳润辉,张川,等.瑞香属植物化学成分及其药理与临床作用的研究[J].药学进展,2005,29(1):22-26.
[3]华耀祖.超滤技术与应用[M].北京：化学工业出版社,2004:65-70.
[4]王晓云,邸立杰,刘静洁.HPLC法测定祖师麻片中祖师麻甲素的含量[J].中国药事,2003,17(4):232-233
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